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世界华人消化杂志. 2004-12-15; 12(12): 2876-2880
Published online 2004-12-15. doi: 10.11569/wcjd.v12.i12.2876
Published online 2004-12-15. doi: 10.11569/wcjd.v12.i12.2876
基因表达谱芯片技术筛选TAHCCP1转染细胞差异表达基因
刘妍, 成军, 纪冬, 王建军, 中国人民解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心、全军病毒性肝炎防治研究重点实验室 北京市 100039
基金项目: 国家自然科学基金攻关项目 , No. C030114020, No. C30070689, No. 30371288, 军队"十、五"科技攻关青年基金项目, No. 01Q138, 北京市自然科学基金面上项目, No. 5042024
通讯作者: 成军, 100039, 北京市西四环中路100号, 中国人民解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心, 全军病毒性肝炎防治研究重点实验室. cj@genetherapy.com.cn
电话: 010-6693-3391 传真: 010-6380-1283
收稿日期: 2004-05-28
修回日期: 2004-08-25
接受日期: 2004-09-30
在线出版日期: 2004-12-15
修回日期: 2004-08-25
接受日期: 2004-09-30
在线出版日期: 2004-12-15
Abstract
目的: 应用基因芯片技术, 检测丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白反式激活基因TAHCCP1的表达对肝母细胞瘤细胞系HepG2基因表达谱的影响, 进一步阐明TAHCCP1在肝细胞中上调或下调的基因, 探索其可能的调节功能.
方法: 设计并合成TAHCCP1基因序列特异性的引物, 应用聚合酶链反应(PCR)技术扩增TAHCCP1基因片段, 以常规的分子生物学技术将获得的TAHCCP1编码基因片段克隆到TA载体中进行核苷酸序列的测定, 构建真核表达载体pcDNA3.1(-)-TAHCCP1, 转染肝母细胞瘤细胞系HepG2细胞, 以空载体pcDNA3.1(-)为平行对照, 制备转染后的细胞裂解液, 提取mRNA, 逆转录为cDNA, 应用基因表达谱芯片技术对两组间差异表达mRNA进行检测和分析.
结果: 在筛选的1 152点cDNA芯片中, 有110种基因的表达水平上调(占9.55%), 98种基因的表达水平下调(8.51%), 包括一些与体内免疫调节、脂类代谢、蛋白质的翻译合成、氧化反应、细胞凋亡及细胞内的信号传导方面的基因.
结论: 应用基因表达谱芯片成功筛选了TAHCCP1转染细胞后差异表达基因, 为进一步阐明TAHCCP1蛋白可能的生物学功能提供依据.
Keywords: N/A