基础研究
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世界华人消化杂志. 2004-11-15; 12(11): 2627-2632
Published online 2004-11-15. doi: 10.11569/wcjd.v12.i11.2627
逆转录病毒载体介导反义K-ras基因治疗胰腺癌的实验研究
蒋奎荣, 刘训良, 苗毅, 卢春, 戴存才, 徐泽宽, 钱祝银
蒋奎荣, 刘训良, 戴存才, 徐泽宽, 钱祝银, 南京医科大学第一附属医院胆胰外科 江苏南京市 210029
苗毅, 南京医科大学第一附属医院胆胰外科 江苏省南京市 210029
卢春, 南京医科大学免疫学与微生物学系 江苏省南京市 210029
蒋奎荣, 男, 1973-02-18生, 江苏省镇江市人, 汉族, 主治医师, 2001年南京医科大学博士研究生, 主要从事胰腺癌分子生物学方面研究.
基金项目: 南京医科大学创新基金项目, No. CX2003014.
通讯作者: 苗毅, 210029, 江苏省南京市广州路300号, 南京医科大学第一附属医院胆胰外科. miaoyi@njmu.edu.cn
电话: 025-83718836-6508
收稿日期: 2004-08-17
修回日期: 2004-09-01
接受日期: 2004-09-04
在线出版日期: 2004-11-15
Abstract

目的: 分离及克隆胰腺癌细胞基因组中K-ras基因片段, 构建含反义K-ras癌基因逆转录病毒载体并探讨其对胰腺癌细胞增生、凋亡的影响及可能的分子机制.

方法: 设计2对PCR引物, 分别在上下游引物中引进BamHI和EcoRI位点, 以胰腺癌细胞株BxPC-3、PC-3基因组DNA为模板扩增K-ras基因外显子1、4及侧翼序列, 将目的基因克隆入逆转录病毒载体pLXSN中, 构建重组质粒, 经PT-67细胞包装后获得重组逆转录病毒. 将该重组逆转录病毒转染上述细胞, 经G418筛选获得稳定细胞, 应用MTT、流式细胞仪和免疫组化法分别研究其增生、凋亡和对胰腺癌p21蛋白表达; 建立胰腺癌裸鼠移植瘤模型, 观察反义K-ras基因体内治疗效果.

结果: 成功构建含反义K-ras基因的重组逆转录病毒载体. 反义K-ras基因抑制胰腺癌细胞增生, 诱导细胞凋亡、下调K-rasmRNA和P21蛋白表达, 并抑制裸鼠胰腺癌移植瘤的生长.

结论: 反义K-ras基因可使胰腺癌细胞增生受到抑制, 并可诱导细胞凋亡和下调K-rasmRNA和P21蛋白表达.

Keywords: N/A