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世界华人消化杂志. 2004-11-15; 12(11): 2568-2571
Published online 2004-11-15. doi: 10.11569/wcjd.v12.i11.2568
Published online 2004-11-15. doi: 10.11569/wcjd.v12.i11.2568
抗肝癌人源化单链抗体hscFv25的体外亲和力成熟
孙志伟, 王双, 杜威世, 俞炜源, 军事医学科学院生物工程研究所 北京市 100071
孙志伟, 男, 1966-06-07生, 黑龙江省海伦市人, 汉族. 1998年第四军医大学博士, 副研究员.
基金项目: 国家自然科学基金资助 , No. 30171065
通讯作者: 孙志伟, 100071, 北京市, 军事医学科学院生物工程研究所. szwyhhh@263.net
电话: 010-66948829 传真: 010-63833521
收稿日期: 2004-08-30
修回日期: 2004-09-30
接受日期: 2004-10-11
在线出版日期: 2004-11-15
修回日期: 2004-09-30
接受日期: 2004-10-11
在线出版日期: 2004-11-15
Abstract
目的: 提高人源化抗肝癌单链抗体hscFv25的亲和力.
方法: 设计并合成人源化抗肝癌单链抗体hscFv25重链及轻链CDR3的半随机突变引物, 构建突变体抗体库, 竞争筛选亲和力更高的突变体抗体, 对所得到的高亲和力的候选抗体, 在大肠杆菌中进行可溶性表达, 并采用细胞ELISA、细胞涂片免疫组织化学染色的方法, 对该抗体进行初步的活性鉴定.
结果: 得到了3株候选高亲和力突变体抗体, 其中的一株在大肠杆菌中获得了可溶性表达后, 进一步的活性检测结果表明, 该抗体的相对亲和力比亲本单链抗体提高了60倍左右, 同时该抗体对肝癌细胞(SMMC-7721)的免疫组织化学染色呈强阳性, 着色情况与亲本抗体相一致, 而对正常肝细胞(HL-02)染色呈阴性.
结论: 成功地构建了人源化抗肝癌单链抗体hscFv25的突变体抗体库, 并筛选到了一株亲和力更高的突变体抗体.
Keywords: N/A