病毒性肝炎
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世界华人消化杂志. 2004-01-15; 12(1): 62-65
Published online 2004-01-15. doi: 10.11569/wcjd.v12.i1.62
HBsAg结合蛋白C-12基因转染肝癌细胞的基因表达谱芯片分析
陆荫英, 刘妍, 成军, 梁耀东, 陈天艳, 邵清, 王琳, 张玲霞
陆荫英, 刘妍, 成军, 梁耀东, 陈天艳, 邵清, 王琳, 张玲霞, 中国人民解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心, 全军病毒性肝炎防治研究重点实验室 北京市 100039
陆荫英, 女, 1973-08-27生, 贵州贵阳人, 汉族, 博士, 2003年军医进修学院毕业, 主治医师. 主要从事肝病的基础研究及临床工作.
基金项目: 国家自然科学基金攻关项目, No. C03011402, No. C30070689; 军队"九、五"科技攻关项目, No. 98D063; 军队回国留学人员启动基金项目, No. 98H038; 军队"十、五"科技攻关青年基金项目, No. 01Q138; 军队"十、五"科技攻关面上项目, No. 01MB135.
通讯作者: 成军, 100039, 北京市西四环中路100号, 中国人民解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心, 全军病毒性肝炎防治研究重点实验室. cj@genetherapy.com.cn
电话: 010-66933391 传真: 010-63801283
收稿日期: 2003-06-25
修回日期: 2003-07-01
接受日期: 2003-07-16
在线出版日期: 2004-01-15
Abstract

目的: 为研究未知功能的乙型肝炎病毒(HBV)核心抗原(HBcAg)结合蛋白C-12的生物学功能, 我们应用基因芯片技术对于C-12转染的HepG2细胞的基因表达谱进行分析, 探索该基因表达对细胞基因表达的影响.

方法: 应用酵母双杂交技术筛选并验证HBcAg的肝细胞结合蛋白基因. 反转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术从HepG2细胞中扩增C-12蛋白编码基因片段, 经测序鉴定后构建表达载体 pcDNA3.1(-)-C-12. 以脂质体技术转染肝母细胞瘤细胞系HepG2, 提取总mRNA, 逆转录为cDNA, 与转染空白表达载体pcDNA3.1(-)的HepG2细胞进行DNA芯片分析并比较.

结果: 筛选出肝文库中HBcAg结合蛋白新基因C-12, 构建的表达载体经过限制性内切酶分析和DNA序列测定鉴定正确. 提取转染细胞的总mRNA并逆转录成为cDNA, 进行DNA芯片技术分析. 在1 159个基因表达谱的筛选中, 发现有16个基因表达水平显著下调, 包括胰岛素受体、丝氨酸/半胱氨酸蛋白酶抑制剂、SUMO-1活化酶亚基1、肿瘤易感基因101、磷酸硒合成酶2 (SPS2)、caspase 4凋亡相关半胱氨酸蛋白酶4、急性淋巴细胞性白血病易位子T、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、DEAD box蛋白多肽21、前折叠素5 (Prefoldin 5)、丝氨酸棕榈酰转移酶、G蛋白通路抑制剂、肿瘤坏死因子受体相关蛋白、转化生长因子1、ADP-核糖基转移酶及1个未知蛋白基因; 1个未知功能蛋白编码基因的表达水平显著上调.

结论: C-12基因的表达对于肝癌细胞基因表达谱有显著影响, 基因表达谱芯片技术是探索基因功能的有效技术途径, 实验结果为进一步阐明C-12与HBcAg结合后的肝细胞生物学变化提供了有力的依据.

Keywords: N/A