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乙型肝炎病毒核壳蛋白变异株在HepG2细胞的HLA- I表达
陈伟红, 周永兴, 中国人民解放军第四军医大学唐都医院传染科陕西省西安市 710038
陈伟红, 女, 1964-10-13生, 浙江省嘉兴市人, 汉族, 医学博士生, 讲师.
何海棠, 张明霞, 刘志华, 中国人民解放军第一军医大学南方医院传染科广东省广州市 510515
通讯作者: 陈伟红, 710038, 陕西省西安市, 中国人民解放军第四军医大学唐都医院传染科. chenwhong101@163.com
电话: 029-3377752 传真: 029-3537377
收稿日期: 2002-10-09
修回日期: 2002-10-20
接受日期: 2002-11-09
在线出版日期: 2003-07-15
修回日期: 2002-10-20
接受日期: 2002-11-09
在线出版日期: 2003-07-15
Abstract
目的
研究HBV adr亚型野生株和核壳蛋白变异株在HepG2细胞表面的HLA-I/抗原肽复合物的表达.
方法
通过定点突变技术将1.2拷贝HBV野生型质粒p3.8Ⅱ构建成核壳蛋白变异株V60和L97. 经序列测定和生物学活性检测后, 野生株和变异株重组质粒分别亚克隆入EB病毒表达载体EBO-plpp以稳定表达. 重组载体EBO-野生株、EBO-V60和EBO-L97分别作内切酶双酶切和序列测定鉴定, 再用脂质体介导转染HepG2细胞, ELISA(Abbott)试剂盒定量检测各株培养上清HBV抗原, 转染细胞用FITC标记的鼠抗HLA-ABC单抗染色, 流式细胞术分析细胞表面HLA-I表达.
结果
3株重组载体经内切酶消化, 电泳后显示2条区带, 分别与1.2拷贝HBV基因组和EBO载体大小相同. 测序结果证实EBO-V60和EBO-L97分别在nt2078 C→G和nt2189 A→C, 保持原定点突变. EBO-野生株的培养上清HBeAg定量S/CO值明显高于变异株V60和L97, 3株HBsAg定量S/N值接近, HBsAg表达相近表明实验的转染效率相当. EBO空载体转染的HepG2细胞HLA-I轻微表达, 3株重组载体转染细胞HLA-I的荧光强度不同, 野生株增强为18.2, L97明显升高至34.5, 而V60降低至3.4.
结论
HBV能增强HepG2 细胞表面HLA-I/抗原肽复合物的表达, 核壳蛋白热点变异V60和L97可使宿主细胞HLA-I表达发生变化.
Keywords: N/A