病毒性肝炎
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世界华人消化杂志. 2003-07-15; 11(7): 947-950
Published online 2003-07-15. doi: 10.11569/wcjd.v11.i7.947
丙型肝炎病毒核心蛋白上调细胞周期调节蛋白Wee1基因表达研究
王建军, 刘妍, 成军, 杨倩, 杨艳杰
王建军, 刘妍, 成军, 杨倩, 杨艳杰, 中国人民解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心、全军病毒性肝炎防治研究重点实验室北京 100039
王建军, 男, 汉族, 1975-06生, 吉林省通化市人, 1999年毕业于第一军医大学, 现为军医进修学院2001级内科传染病学专业硕士研究生, 主要从事肝炎病毒蛋白的反式调节作用研究.
基金项目: 国家自然科学基金资助项目, No. C39970674, No. C03011402; 归国留学人员科研启动基金资助项目, No. 98H038.
通讯作者: 成军, 100039, 北京市西四环中路100号, 中国人民解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心、全军病毒性肝炎防治研究重点实验室. cj@genetherapy.com.cn
电话: 010-66933391 传真: 010-63801283
收稿日期: 2003-01-11
修回日期: 2003-02-20
接受日期: 2003-03-21
在线出版日期: 2003-07-15
Abstract
目的

了解丙型肝炎病毒核心蛋白和细胞周期调节蛋白Wee1基因表达的关系, 研究HCV核心蛋白在HCV致病的分子生物学机制中的作用.

方法

应用聚合酶链反应(PCR)扩增Wee1基因启动子, 命名为Weep. 以T-A克隆法, 将Weep基因片段连入载体pGEM-T. 将获得的质粒pT-Weep, 与报告质粒pCAT3-basic分别用KpnI和XhoI 双酶切后构建Wee1启动子报告载体pCAT3-Weep, 分别以重组报告载体pCAT3-Weep和pcDNA3.1(-)-core瞬时转染HepG2细胞, 以转染pCAT3 basic的HepG2细胞为阴性对照, 48 h后收获细胞. 应用酶联免疫黏附方法(ELISA)检测细胞中氯霉素乙酰转移酶(CAT)的表达活性, 以了解HCV核心蛋白对Wee1基因启动子的反式激活作用.

结果

构建的表达载体pcDNA3.1(-)-core和报告载体pCAT3-Weep经过序列分析和酶切鉴定正确. pCAT3-Weep和pcDNA3.1(-)-core瞬时转染的HepG2细胞的CAT表达活性是CAT3空载体的3.4倍, pCAT3-Weep的2.3倍.

结论

丙型肝炎病毒核心蛋白可反式激活Wee1基因启动子, 进而上调细胞周期调节基因Wee1的表达.

Keywords: N/A