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基因表达谱芯片技术筛选丙型肝炎病毒非结构蛋白3反式调节靶基因
成军, 刘妍, 洪源, 王建军, 杨倩, 中国人民解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心、全军病毒性肝炎防治研究重点实验室北京市 100039
成军, 男, 1963-08-17生, 山东省淄博市人, 汉族. 1986年毕业于第一军医大学军医系, 获医学学士学位, 1989年毕业于军医进修学院, 获传染病学硕士学位, 1994年毕业于北京医科大学, 获传染病学博士学位, 1994-11-17/1997-12-01在美国得克萨斯大学健康科学中心临床免疫与传染病科完成博士后研究, 教授, 主任医师. 现任中华医学会传染病与寄生虫病学分会副主任委员、中华医学会热带病与寄生虫病学分会全国常委、全军医学科学技术委员会传染病与寄生虫病学会委员. 目前从事传染病特别是病毒性肝炎的临床医疗工作和基础研究工作, 学术研究方向是肝炎病毒与肝细胞相互作用的分子生物学机制, 已出版专著5部, 发表论文及综述300篇.
基金项目: 国家自然科学基金攻关项目 , No. C03011402, No.C30070689 ; 军队"九、五"科技攻关项目 , No. 98D063 ; 军队回国留学人员启动基金项目 , No. 98H038 ; 军队"十、五"科技攻关青年基金项目 , No. 01Q138 ; 军队"十、五"科技攻关面上项目 , No. 01MB135 .
通讯作者: 成军, 100039, 北京市西四环中路100号, 中国人民解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心、全军病毒性肝炎防治研究重点实验室. cj@genetherapy.com.cn
电话: 010-66933391 传真: 010-63801283
收稿日期: 2003-01-11
修回日期: 2003-02-20
接受日期: 2003-03-21
在线出版日期: 2003-07-15
修回日期: 2003-02-20
接受日期: 2003-03-21
在线出版日期: 2003-07-15
Abstract
目的
丙型肝炎病毒(HCV)的非结构蛋白3(non-structural protein 3, NS3)是由HCV基因组编码的具有多种功能的蛋白质. NS3蛋白的表达对于HCV感染肝细胞的基因表达谱具有显著影响. 为了研究NS3蛋白反式调节的靶基因, 我们应用基因芯片技术对于pcDNA3.1(-)和pcDNA3.1(-)-NS3分别转染的HepG2细胞的基因表达谱进行分析.
方法
以含有HCV-H全基因组cDNA的质粒pBRTM3011作为模板, 应用聚合酶链反应(PCR)技术扩增NS3蛋白编码基因片段, 以常规的分子生物学技术构建表达载体pcDNA3.1(-)-NS3. 以脂质体技术转染肝母细胞瘤细胞系HepG2, 提取总mRNA, 逆转录为cDNA, 与转染空白表达载体pcDNA3.1(-)的HepG2细胞进行DNA芯片分析并比较.
结果
构建的表达载体经过限制性内切酶分析和DNA序列测定, 证实准确无误. 以单链可变区抗体的Western blot杂交技术证实构建的表达载体转染HepG2细胞之后有NS3蛋白的表达, 提取高质量的总mRNA并进行逆转录成为cDNA, 进行DNA芯片技术分析. 在1152个基因表达谱的筛选中, 发现有34个基因表达水平显著上调, 37个基因表达水平显著下调.
结论
HCV的NS3蛋白是一种反式激活因子. NS3基因的表达对于肝细胞基因表达谱有显著影响. DNA芯片技术是分析反式激活靶基因的有效技术途径.
Keywords: N/A