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TDI-FP法分析肝细胞癌组织中HBV核心启动子双突变
吕贯廷, 白玉杰, 张剑, 阎小君, 中国人民解放军第四军医大学全军基因诊断技术应用研究所陕西省西安市 710032
吕贯廷, 男, 1978-03-28, 河南省许昌人, 汉族, 2000年河南师范大学生命科学学院毕业, 现为第四军医大学全军基因诊断技术应用研究所生物化学与分子生物学专业硕士研究生.
卢冰, 九江市卫生防疫站江西省九江市 332000
通讯作者: 阎小君, 710032, 陕西省西安市长乐西路17号, 中国人民解放军第四军医大学全军基因诊断技术应用研究所.
电话: 029-3374771
收稿日期: 2002-08-17
修回日期: 2002-08-20
接受日期: 2002-09-12
在线出版日期: 2003-07-15
修回日期: 2002-08-20
接受日期: 2002-09-12
在线出版日期: 2003-07-15
Abstract
目的
通过TDI-FP法检测肝细胞癌组织中HBV DNA核心启动子区A1762 T和G1764 A双突变并分析二者之间的相关性, 同时建立一种新的突变检测方法.
方法
以20例肝细胞癌组织为研究标本, 通过PCR扩增含有HBV DNA核心启动子区的DNA片段, 然后用TDI-FP法检测R110或TAMRA标记ddNTP的FP值, 鉴定nt1762和nt1764的基因型.
结果
20例肝细胞癌组织中经HBV检测试剂盒鉴定后, 18例为HBV感染阳性, 阳性率为90％. 经TDI-FP检测, 其中有13例为T1762和A1764双突变型, 1例为T1762-A1764/A1762-G1764突变杂合型, 4例检测结果为阴性. 经测序, 阳性结果及突变杂合型与TDI-FP结果完全吻合, 阴性结果中2例在nt1762前有8个核苷酸缺失突变, 导致突变检测引物无法与模板结合, 故产生TDI-FP检测出现假阴性结果. 在肝细胞癌组织HBV DNA中, T1762-A1764突变阳性率为75％, 突变杂合型为5%, 野生型为10%.
结论
在肝细胞癌组织中, HBV感染率非常高, 而且其核心启动子区出现nt1762和nt1764双突变率较高, 提示双突变与肝细胞癌关系密切; 同时本实验所建立的TDI-FP法操作快速简便, 可以进行高通量自动化操作, 具有进一步推广应用的前景.
Keywords: N/A