病毒性肝炎
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世界华人消化杂志. 2003-06-15; 11(6): 697-700
Published online 2003-06-15. doi: 10.11569/wcjd.v11.i6.697
HCV-Fc融合基因疫苗真核表达载体的构建及表达
冯志华, 王全楚, 周永兴, 郝春秋, 聂青和
冯志华, 王全楚, 周永兴, 郝春秋, 聂青和, 中国人民解放军第四军医大学唐都医院全军感染病诊疗中心 陕西省西安市 710038
冯志华, 女, 1964-11-08生, 山西省忻州市人, 汉族, 医学博士, 副教授, 副主任医师, 硕士研究生导师. 主要从事病毒性肝炎治疗方面的研究, 发表论文22篇. 参加编写医学专著4部.
基金项目: 国家自然科学基金资助课题, No. 30170822.
通讯作者: 冯志华, 710038, 陕西省西安市灞桥区新寺路1号, 中国人民解放军第四军医大学唐都医院全军感染病诊疗中心. fengzh@fmmu.edu.cn
电话: 029-3577742 传真: 029-3537377
收稿日期: 2002-10-25
修回日期: 2002-11-20
接受日期: 2002-11-25
在线出版日期: 2003-06-15
Abstract
目的

构建能表达HCV C-Fc融合基因的真核表达载体, 为进一步修饰和转染树突状细胞, 制备能高效表达HCV C和Fc基因的树突状细胞疫苗做准备.

方法

用分别含有Kpn I和Xhol I酶切位点的HCV C区基因上、下游引物, 以含有HCV H株基因序列的质粒pBRTM/HCV1-3011为模板, 通过PCR扩增获得HCV C区基因片段回收后, 以Kpn I 和Xhol I 双酶切, 定向插入到含IgG1 Fc基因的质粒pIgC3双粘端位点之间, 获得重组表达质粒pHCVFc. 通过Kpn I 双位点酶切、PCR及插入片段序列测定对质粒进行了鉴定. 以抗HCV C单克隆抗体为一抗, 利用间接免疫荧光法检测了pHCV-IgFc在人肝癌细胞7 721中的瞬时表达.

结果

酶切、PCR及测序鉴定证实, pHCV-IgFc插入片段为HCV C区基因片段, 免疫荧光法检测表明其可以在7 721细胞中瞬时表达.

结论

构建的质粒pHCV-IgFc可以在7721细胞中瞬时表达HCV C区基因, 为研究HCV C-Fc融合基因修饰的树突状细胞的功能奠定了基础.

Keywords: N/A