病毒性肝炎
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世界华人消化杂志. 2003-02-15; 11(2): 173-177
Published online 2003-02-15. doi: 10.11569/wcjd.v11.i2.173
HCVNS3蛋白对正常人源肝细胞生长及MAPK磷酸化的影响
孙意, 程瑞雪, 冯德云, 欧阳小明, 郑晖
孙意, 中南大学湘雅二医院病理科 湖南省长沙市 410011
程瑞雪, 冯德云, 郑晖, 中南大学湘雅医学院病理教研室 湖南省长沙市 410078
欧阳小明, 广州医学院附二院病理科 广东省广州市 510260
孙意, 男, 1971-09-20生, 浙江省诸暨市人, 汉族, 2001年中南大学湘雅医学院硕士研究生毕业. 主要从事肝脏病理研究.
基金项目: 卫生部科学基金资助课题项目, No. 98-1-110.
通讯作者: 程瑞雪, 410078, 湖南省长沙市, 中南大学湘雅医学院病理教研室. chengrx@cs.hn.cn
电话: 0731-4805393
收稿日期: 2002-04-26
修回日期: 2002-05-01
接受日期: 2002-05-11
在线出版日期: 2003-02-15
Abstract

目的: 研究丙型肝炎病毒非结构区3(HCV NS3)蛋白对正常人源肝细胞的转化及MAPK磷酸化调节的作用.

方法: 利用脂质体介导转染技术和G418筛选得到稳定表达NS3蛋白的正常人源性肝细胞QSG7701, PCR和免疫组化S-P法检测细胞中NS3的表达; 细胞记数和软琼脂实验鉴定其生物学性质; 抗磷酸化MAPK抗体和抗MAPK抗体Western blot检测转染细胞MAPK活性及表达.

结果: HCV NS3转染的QSG7701肝细胞, 其NS3蛋白过度表达于细胞质; 真核表达质粒pRcHCNS3-5'转染细胞倍增时间为12 h, 较pRcHCNS3-3'、pRcCMV转染细胞和未转染的QSG7701明显缩短(分别24 h, 26 h和28 h). pRcHCNS3-5'、pRcHCNS3-3'和pRcCMV转染细胞及正常肝细胞在软琼脂中的克隆形成率分别为33%、1.33%、1.46%、1.11%, pRcHCNS3-5'形成的克隆明显高于其他三种细胞(P<0.01). pRcHCNS3-5'转染细胞MAPK磷酸化程度明显高于其他三种细胞(分别为8 858±877, 5 612±656, 2 212±245和989±188). (P<0.01), 而MAPK的表达量没有差异(P>0.05).

结论: 人源性正常肝细胞QSG7701是研究HCV NS3蛋白致病机制的较好的细胞系; HCV NS3 蛋白N端多肽具有促进细胞增生和改变细胞表型的作用; HCV NS3 蛋白N端多肽能上调MAPK活性, 不影响MAPK的表达量.

Keywords: N/A