基础研究
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世界华人消化杂志. 2003-10-15; 11(10): 1515-1519
Published online 2003-10-15. doi: 10.11569/wcjd.v11.i10.1515
慢性乙型肝炎病毒清除自杀基因平衡制约载体系统的构建
阚全程, 余祖江, 雷延昌, 杨东亮, 郝连杰
阚全程, 雷延昌, 杨东亮, 郝连杰, 华中科技大学同济医学院附属同济医院临床免疫研究室 湖北省武汉市 430030
阚全程, 男, 1963-09-24生, 河南信阳市人, 汉族, 1992年河南医科大学(现郑州大学医学院)药理学硕士, 现为华中科技大学同济医学院分子免疫学博士生.
余祖江, 郑州大学第一附属医院感染科 河南省郑州市 450052
基金项目: 国家"十五"科技攻关项目, No. 2001BA705B05; 国家重大基础研究项目, No. 973-20014CB51008.
通讯作者: 杨东亮, 430030, 湖北省武汉市解放大道1095号, 华中科技大学同济医学院附属同济医院临床免疫研究室. dlyang@tjh.tjmu.edu.cn
电话: 027-83662894
收稿日期: 2003-08-08
修回日期: 2003-08-20
接受日期: 2003-09-01
在线出版日期: 2003-10-15
Abstract
目的

建立清除乙型肝炎病毒(HBV)自杀基因平衡制约载体系统, 靶向清除HBV感染的肝细胞, 抑制慢性乙型肝炎和肝硬化患者免疫再活动.

方法

逆转录PCR(RT-PCR)扩增丙型肝炎病毒(HCV)基因组中核糖体插入位点(IRES), 以pcDNA3载体为基础, 构建双顺反子表达载体. 同时在IRES位点的上游克隆HBV表面基因的部分反义序列和HCV 全长核心基因, 在IRES位点下游克隆胸腺苷激酶基因, PCR、酶切和测序鉴定. 构建的清除乙型肝炎病毒(HBV)自杀基因平衡制约载体系统分别转染培养基含有更昔洛韦的HepG2细胞和2.2.15细胞.

结果

构建的清除乙型肝炎病毒(HBV)自杀基因平衡制约载体系统可以选择性促使2.215细胞凋亡(实验组细胞凋亡率为15%, 而对照组仅为6%); 抑制2.2.15细胞在培养基中分泌乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg), 统计学分析表明, HBsAg在培养基中检测滴度, 在两组之间有显著性差异(P<0.05).

结论

构建以HBV 表面基因为靶基因, 自杀基因为效应基因的自杀基因制约平衡系统, 可能为下一步慢性乙型肝炎的基因治疗提供理想的基因治疗载体.

Keywords: N/A