胃癌
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世界华人消化杂志. 2003-01-15; 11(1): 14-17
Published online 2003-01-15. doi: 10.11569/wcjd.v11.i1.14
利用细菌内重组腺病毒系统构建胃癌MG7-Ag模拟表位疫苗
林涛, 丁杰, 孟繁平, 韩全利, 喻召才, 郭长存, 刘志国, 樊代明
林涛, 丁杰, 孟繁平, 韩全利, 喻召才, 郭长存, 刘志国, 樊代明, 中国人民解放军第四军医大学西京医院全军消化疾病研究所 陕西省西安市 710032
林涛, 男, 1971-11-17生, 吉林省白城市人, 汉族.1995年山东医科大学本科毕业, 现为第四军医大学西京医院消化病研究所硕士研究生, 主要从事肿瘤免疫研究.
基金项目: 国家自然科学基金资助, No. 398707424.
通讯作者: 丁杰, 710032, 陕西省西安市长乐西路15号, 中国人民解放军第四军医大学西京医院消化内科. taolt1@fmmu.edu.cn
电话: 029-3375230
收稿日期: 2002-07-23
修回日期: 2002-07-25
接受日期: 2002-07-31
在线出版日期: 2003-01-15
Abstract

目的: 以复制缺陷的腺病毒为疫苗载体, 构建基于胃癌MG7-Ag模拟表位的重组腺病毒疫苗.

方法: 将编码MG7-Ag模拟表位的互补序列设计到上游引物的5/端. 以含有HBcAg全序列的质粒p1.2Ⅱ为模板, 通过PCR扩增, 获得MG7-Ag模拟表位与HBcAg的融合基因. 经序列测定证实后, 亚克隆至pAdTrack-CMV穿梭质粒, 再与pAdEasy-1质粒在大肠杆菌BJ5 183中进行同源重组. 经抗性筛选及酶切鉴定的重组质粒, 再用导入293细胞进行包装, 利用Adeasy系统上的绿色荧光蛋白标签鉴定病毒表达.

结果: 序列测定证实, PCR产物为胃癌MG7-Ag模拟表位与HBcAg的融合基因片段; 酶切鉴定表明胃癌MG7-Ag模拟表位与HBcAg的融合基因片断插入了pAdTrack-CMV穿梭质粒, 卡那霉素进行抗性筛选及PacⅠ酶切鉴定证实腺病毒重组质粒构建成功. PacⅠ酶切线性化的重组质粒导入293细胞3 d后见明显的绿色荧光蛋白表达. 回收病毒, 可重复感染293细胞, 证实有感染能力的病毒颗粒包装成功.

结论: 胃癌MG7-Ag模拟表位的重组腺病毒载体的构建成功, 为进一步研究胃癌MG7-Ag模拟表位诱发抗胃癌免疫打下了基础.

Keywords: N/A