Published online 2013-12-28. doi: 10.11569/wcjd.v21.i36.4116
修回日期: 2013-11-06
接受日期: 2013-11-25
在线出版日期: 2013-12-28
目的: 本研究拟明确miR-126对胃癌细胞血管内皮生长因子A(vascular endothelial growth factor-A, VEGFA)及其下游磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(phosphatidylinositol-3 kinase/protein kinase B, PI3K/Akt)和丝裂原活化蛋白激酶/细胞外调节蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases/extracellular regulated protein kinases, MAPK/Erk)两条信号通路上核心蛋白Akt、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycinprotein, mTOR)和细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases, Erk1/2)表达的调控作用, 从而来初步探讨miR-126影响胃癌细胞恶性表型的可能机制.
方法: 选取人胃腺癌细胞SGC-7901作为实验细胞, 分空白组(mock)、miR-126慢病毒实验组(Lenti-miR-126)、慢病毒对照组(Lenti-control)、miR-126寡核苷酸抑制组(locked nucleic acid anti miR-126 oligonucleotides group, LNA-miR-126)与寡核苷酸对照组(LNA-control)共5组. 利用miR-126慢病毒和miR-126 LNA power inhibitor探针转染SGC-7901细胞系, 转染后72 h观察绿色荧光蛋白(green fluorescent protein, GFP)的表达情况, 感染效率>70%, 提取细胞总小RNA和总蛋白, 利用实时定量PCR检测miR-126的表达情况, 同时通过Western blot检测VEGFA及下游信号通路上核心蛋白Erk、Akt、mTOR的表达.
结果: Western blot显示miR-126慢病毒实验组的VEGFA及其下游靶蛋白Akt、mTOR、Erk1/2表达较空白组明显降低(1.00±0.00 vs 1.60±0.19, 1.00±0.00 vs 1.89±0.23, 1.00±0.00 vs 2.11±0.38, 1.00±0.00 vs 1.52±0.36, 均P<0.01), miR-126寡核苷酸抑制组的VEGFA及其下游靶蛋白Akt、mTOR、Erk1/2表达较空白组明显升高(2.46±0.31 vs 1.60±0.19, 3.09±0.44 vs 1.89±0.23, 3.83±0.64 vs 2.11±0.38, 2.26±0.30 vs 1.52±0.36, 均P<0.01).
结论: miR-126可调控胃癌细胞VEGFA及其下游靶蛋白的表达, 胃癌中可能存在miR-126/VEGFA信号通路调控胃癌的血管新生.
核心提示: 本文探讨了miR-126对胃癌细胞血管内皮生长因子A(vascular endothelial growth factor-A, VEGFA)及其下游靶蛋白的调控作用, 同时结合大量的前人研究及本课题组前期的研究, 初步推测胃癌中可能存在miR-126/VEGFA信号通路调控胃癌的血管新生.