基础研究
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世界华人消化杂志. 2009-02-28; 17(6): 549-553
Published online 2009-02-28. doi: 10.11569/wcjd.v17.i6.549
体外RNA干扰抑制RegⅣ基因表达对胃癌细胞增殖及凋亡的影响
刘兵, 项明, 于颖彦, 杨秋蒙, 蔡劬, 陈雪华, 李建芳, 刘炳亚, 朱正纲
刘兵, 项明, 于颖彦, 杨秋蒙, 蔡劬, 陈雪华, 李建芳, 刘炳亚, 朱正纲, 上海交通大学医学院附属瑞金医院普外科 上海消化外科研究所 上海市 200025
刘兵, 在读硕士研究生, 主要从事胃癌综合治疗方面的研究.
基金项目: 国家科技部"十一五""863"重大专项基金资助项目, No. 2006AA02A402; No. 2006AA02A301; 国家自然科学基金资助项目, No. 30572127, No. 30770961, No. 30670939; 上海市浦江人才计划基金资助项目, No. PJ200700367; 上海市科委重点基础研究基金资助项目, No. 05JC14013.
作者贡献分布: 本课题在项明, 于颖彦及杨秋蒙的指导下由刘兵设计; 蔡劬, 陈雪华, 李建芳及刘炳亚提供技术指导; 朱正纲为课题总负责人; 研究过程、数据分析以及论文写作由刘兵操作完成; 于颖彦对文章进行批评性审阅.
通讯作者: 项明, 200025, 上海市, 上海交通大学医学院附属瑞金医院普外科. xm@medmail.com
电话: 021-64370045 传真: 021-64373909
收稿日期: 2008-12-21
修回日期: 2009-01-16
接受日期: 2009-01-19
在线出版日期: 2009-02-28
Abstract

目的: 拟探讨RegⅣ基因在胃癌细胞中的表达及干扰该基因对胃癌细胞增殖和凋亡的影响. 

方法: 应用实时定量PCR方法检测九株胃癌细胞株中RegⅣ基因的mRNA表达. 针对RegⅣ基因设计三条小干扰RNA片段(siRNA1、siRNA2、siRNA3), 瞬时转染高表达胃癌细胞株, 实时定量PCR方法检测转染后RegⅣ基因的mRNA的表达水平, CCK-8法检测细胞增殖能力, 流式细胞仪检测细胞凋亡. 

结果: 以永生化正常胃黏膜细胞株GES-1作为参照, 除MKN-45和SNU-1胃癌细胞株外, 其余胃癌细胞株中RegⅣ表达水平均升高5倍以上, 尤以SNU-16细胞株明显, 其RegⅣ的表达水平高出GES-1细胞数千倍, 遂选用SNU-16细胞进行RNA干扰. 合成的三对siRNA对RegⅣ基因表达均有明显抑制作用, 抑制率分别为79.3%、77.4%和60.4%. 选用siRNA1干扰SNU-16细胞株后96 h和120 h, 其细胞增殖率受到明显抑制(P = 0.0057, 0.0173). 流式细胞仪检测显示72 h细胞凋亡率明显增加(P = 0.0231).

结论: 干扰RegⅣ基因具有抑制胃癌细胞增殖, 促进凋亡的作用, RegⅣ基因可能成为胃癌基因靶向治疗的分子靶点.

Keywords: 胃癌; RegⅣ; RNA干扰; 生长抑制; 凋亡