基础研究
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世界华人消化杂志. 2009-02-18; 17(5): 454-458
Published online 2009-02-18. doi: 10.11569/wcjd.v17.i5.454
酵母双杂交技术筛选人胰腺细胞中HCV 1b NS3结合蛋白基因
胡传翠, 张锦前, 王琦, 李国力, 李朝品, 成军
胡传翠, 李朝品, 皖南医学院人体寄生虫教研室 安徽省芜湖市 241001
张锦前, 王琦, 李国力, 成军, 北京地坛医院传染病研究所 北京市 100015
胡传翠, 2006级硕士研究生, 主要从事感染性疾病方面的研究.
基金项目: 国家自然科学基金资助项目, No. 30600524.
作者贡献分布: 此课题由张锦前设计; 研究过程由胡传翠, 张锦前, 王琦及李国力操作完成; 数据分析由胡传翠, 张锦前, 王琦及李国力完成; 本论文写作由胡传翠, 张锦前, 李朝品及成军完成; 本论文由李朝品指导完成.
通讯作者: 成军, 100015, 北京市朝阳区京顺东街8号, 北京地坛医院传染病研究所. cj@genetherapy.com.cn
电话: 010-84322006
收稿日期: 2008-12-16
修回日期: 2009-01-04
接受日期: 2009-01-05
在线出版日期: 2009-02-18
Abstract

目的: 应用酵母双杂交技术筛选人胰腺cDNA文库中与HCV 1b亚型非结构蛋白NS3相互作用的结合蛋白的编码基因, 为进一步研究HCV影响糖、脂代谢机制奠定实验基础. 

方法: 扩增人胰腺cDNA文库并纯化鉴定, 纯化后的文库质粒转化酵母菌Y187; 构建诱饵质粒PGBKT7-NS3并转化酵母菌AH109, 在色氨酸缺陷型培养基(SD/-Trp)上筛选阳性菌落. 应用酵母双杂交系统3将阳性重组AH109菌株与重组酵母菌株Y187进行配合, 在四缺培养基(SD/-Trp/-Leu/-His/-Ade)和铺有X-α-gal的四缺培养基上进行筛选, 提取蓝色酵母菌落质粒, 电转化大肠埃希菌DH5α后提取质粒测序, 对测序结果进行序列比对和分析. 

结果: 成功构建人胰腺cDNA文库和pGBKT7-NS3重组质粒; 将pGBKT7-NS3质粒转化AH109酵母菌株后, 并从人胰腺cDNA文库中筛选出11种与HCV NS3蛋白相结合的蛋白基因.

结论: 筛选出的与HCV NS3蛋白结合的胰腺蛋白基因中, 部分与2型糖尿病、肝脏脂肪变性密切相关.

Keywords: 非结构蛋白3; 丙型肝炎病毒; 人胰腺cDNA文库; 酵母双杂交