基础研究
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世界华人消化杂志. 2009-04-18; 17(11): 1079-1084
Published online 2009-04-18. doi: 10.11569/wcjd.v17.i11.1079
siRNA干扰Slug基因表达对胰腺癌BxPC-3细胞放射敏感性的影响
王齐全, 魏小斌, 郑健超
王齐全, 郑健超, 海口市人民医院消化内科 海南省海口市 527010
魏小斌, 海口市人民医院中心实验室 海南省海口市 527010
王齐全, 副主任医师, 主要从事消化系肿瘤的基础与临床的研究.
作者贡献分布: 此课题由王齐全、魏小斌及郑健超设计; 研究过程由王齐全操作完成; 数据分析由魏小斌完成; 本论文写作由王齐全完成.
通讯作者: 王齐全, 副主任医师, 527010, 海南省海口市, 海口市人民医院. love5028@126.com
电话: 0411-23223444
收稿日期: 2009-02-13
修回日期: 2009-03-12
接受日期: 2009-03-23
在线出版日期: 2009-04-18
Abstract

目的: 探讨siRNA干扰Slug基因表达对BxPC-3细胞γ射线敏感性的影响.

方法:  制备携带有绿色荧光蛋白(GFP)报告基因的siRNA-Slug质粒载体, 用脂质体转染法将siRNA-Slug(实验组)、pGCL-GFP(阴性对照)导入BxPC-3细胞(空白对照组), G418筛选阳性细胞, 获得稳定转染的阳性克隆. 将转染载体的BxPC-3阳性克隆细胞和未转染载体的BxPC-3细胞采用60Co γ射线对其进行照射3 Gy. RT-PCR和Western blot检测不同组细胞经γ射线后的Slug、PUMA表达, MTT检测细胞生长抑制, 流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡.  

结果: 实验组细胞内Slug基因被有效沉默; 实验组细胞内PUMA蛋白和PUMA mRNA的相对值明显高于对照组(0.98±0.15 vs 0.32±0.08, 1.03±0.16 vs 0.38±0.08, 均P<0.05). 实验组细胞生长抑制率和凋亡率分别高于对照组(37.46%±9.63% vs 2.13%±0.12%, 32.4%±9.5% vs 3.47%±0.18%, 均P<0.05). 实验组细胞受到γ射线作用后, PUMA mRNA和PUMA蛋白表达明显增加, 分别为1.26±0.18和1.23±0.18, 生长抑制率和凋亡率增加, 分别为78.4%±18.5%和73.3%±17.4%, 与射线作用的对照组和阴性对照组比, 差异均有统计学意义(均P<0.01).

结论:  siRNA干扰Slug基因后, 解除Slug对PUMA基因的抑制, 增强BxPC-3对γ射线的敏感性.

Keywords: 胰腺癌; P53正向凋亡上调因子; Slug基因; RNA干扰; 放射治疗