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世界华人消化杂志. 2008-09-08; 16(25): 2831-2835
Published online 2008-09-08. doi: 10.11569/wcjd.v16.i25.2831
Published online 2008-09-08. doi: 10.11569/wcjd.v16.i25.2831
VEGF反义寡核苷酸对体外生长的大肠癌HT-29细胞的抑制作用
焦得闯, 吴爱国, 邵国利, 纪术峰, 南方医科大学附属珠江医院普通外科 广东省广州市 510282
焦得闯, 南方医科大学附属珠江医院普外科硕士在读, 主要从事大肠癌基因治疗的研究.
基金项目: 广东省科技计划资助项目, No. 2005B31201011.
作者贡献分布: 吴爱国与焦得闯对此文所作贡献均等; 此课题由吴爱国指导设计; 研究过程由焦得闯、邵国利及纪术峰操作完成; 研究所用新试剂及分析工具由纪术峰提供; 数据分析由焦得闯与邵国利完成; 本论文写作由焦得闯完成.
通讯作者: 吴爱国, 510282, 广东省广州市工业大道中253号, 南方医科大学附属珠江医院普外科. wagjiaoshou@163.com
电话: 020-61643207 传真: 020-61643207
收稿日期: 2008-06-12
修回日期: 2008-07-14
接受日期: 2008-07-21
在线出版日期: 2008-09-08
修回日期: 2008-07-14
接受日期: 2008-07-21
在线出版日期: 2008-09-08
Abstract
目的: 探讨血管内皮生长因子(VEGF)反义寡核苷酸(ASODN)对体外生长的人大肠癌HT-29细胞的抑制作用.
方法: 实验设空白对照组、脂质体转染组、错义链转染组(SODN组)和不同浓度反义链转染组(ASODN组). 用LipofectamineTM2000介导的VEGF ASODN和错义寡核苷酸(SODN)转染人大肠癌细胞株HT-29, 半定量RT-PCR检测各组细胞VEGF mRNA的表达; Western blot测定转染48、72 h后VEGF蛋白表达; MTT法和流式细胞术检测细胞增殖和凋亡.
结果: 转染48 h后, ASOND组的VEGF mRNA表达水平明显低于脂质体对照组和SODN组(0.455±0.032 vs 0.934±0.031, 0.915±0.004, P<0.01); 脂质体对照组与SODN组之间无显著差异. 细胞转染48、72 h后, ASODN组蛋白表达明显弱于脂质体对照组和SODN组, 且72 h弱于48 h. 与对照组比较, VEGF ASODN对HT-29细胞有明显的生长抑制作用, 并且抑制呈剂量和时间依赖性(P<0.05).
结论: VEGF ASODN通过抑制VEGF的基因表达, 对体外生长的人大肠癌HT-29细胞的增殖进行抑制.
Keywords: 反义寡核苷酸; 血管内皮生长因子; 大肠癌; MTT法; 流式细胞术; 聚合酶链反应; 免疫印迹