大肠癌
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世界华人消化杂志. 2005-07-15; 13(13): 1519-1523
Published online 2005-07-15. doi: 10.11569/wcjd.v13.i13.1519
FLIP干扰性小RNA促进大肠癌细胞的凋亡
孙保存, 臧凤琳, 牛瑞芳, 魏熙胤, 赵秀兰, 张诗武
孙保存, 臧凤琳, 牛瑞芳, 魏熙胤, 张诗武, 天津医科大学肿瘤研究所 天津市 300060
赵秀兰, 天津医科大学病理教研室 天津市 300070
基金项目: 天津市自然科学基金资助项目, No. 013611511.
通讯作者: 孙保存, 300060, 天津市河西区体院北环湖西路, 天津医科大学肿瘤研究所. baocunsun@eyou.com
电话: 022-23340123-5224
收稿日期: 2005-04-26
修回日期: 2005-05-07
接受日期: 2005-05-14
在线出版日期: 2005-07-15
Abstract

目的: 研究对应FLIP基因的siRNA片段对大肠癌细胞株HT-29凋亡的影响, 明确FLIP在Fas介导的凋亡途径中的作用.

方法: 体外培养大肠癌细胞HT-29, 通过电穿孔技术将特异性siRNA片段转染入细胞, 半定量RT-PCR法判断干扰前后FLIP mRNA水平的变化, 分析RNA干扰的特异性、时效性, 并比较对应不同位点的两个siRNA片段对FLIP的干扰效果.经凋亡诱导型抗体激活后, 以Annexin V染色法及DNA降解片段检测分析干扰前后HT-29细胞对Fas介导的凋亡敏感性的改变.

结果: 特异性siRNA片段能有效降低FLIP mRNA水平, 最大干扰效率达65.02%, 明显高于作为对照的非相关片段; 干扰作用于转染后24 h即可出现, 48 h达高峰, 72 h稍有降低; 对应不同位点的两个siRNA片段对FLIP均可产生干扰作用, 彼此间差别不大.在诱导型抗体的刺激下, 与未转染细胞相比, 转染siRNA的HT-29细胞中凋亡细胞所占比例明显增加.

结论: 特异性siRNA片段可显著降低FLIP基因mRNA的表达水平, 并提高HT-29细胞对Fas介导的凋亡敏感性.以FLIP为靶点的RNA干扰技术可望成为大肠癌基因治疗的新方法.

Keywords: 大肠癌; FLIP; siRNA; 凋亡