修回日期: 2015-06-16
接受日期: 2015-06-24
在线出版日期: 2015-08-08
目的: 研究c-Cbl和Cbl-b在胃癌组织中的表达及其临床意义.
方法: 选取2012-01/2014-12河南医学高等专科学校附属医院经手术切除得到了胃癌组织标本100例, 设为观察组, 另外选择其中20例癌旁正常胃组织标本设为对照组, 将2组标本均制为组织芯片, 通过免疫组织化学方法对c-Cbl和Cbl-b表达的情况进行检测, 研究其表达与临床病理特征间的关系.
结果: c-Cbl和Cbl-b在观察组中的阳性率分别为72.0%与83.0%, 均高于对照组(阳性率分别为20.0%与25.0%); c-Cbl在胃癌组织中的表达与胃癌的病理分期和浸润深度呈明显正相关, 其表达量随着病理分期加重、浸润深度加深而增加. Cbl-b在胃癌组织中的表达与胃癌的病理分期和淋巴结是否转移呈明显正相关, 其表达量随着病理分期加重、淋巴结发生转移而增加; c-Cbl和Cbl-b在胃癌组织中的表达呈正相关(P<0.05), 两种蛋白同时呈强阳性表达者29例, 病例的临床病理特征主要是分期晚、淋巴结转移数目多、肿瘤组织浸润程度深和分化程度差.
结论: 胃癌的发展与侵袭会增加c-Cbl和Cbl-b表达的阳性率, c-Cbl和Cbl-b的检测对于胃癌的临床诊断有一定的临床意义与价值, 值得推广.
核心提示: 近几年, 胃癌的发病率逐年升高, 严重影响了患者的生命健康. 了解胃癌的发病机制, 尽早确诊并实施治疗措施, 是保障胃癌患者生命健康的重要途径. Cbl-b和c-Cbl在胃癌组织中的表达同分化程度有关. 本文研究结果显示, c-Cbl和Cbl-b在胃癌组织中的阳性率分别为72.0%与83.0%, 均高于正常组织(阳性率分别为20.0%与25.0%); c-Cbl在胃癌组织中的表达与胃癌的病理分期和浸润深度呈明显正相关; Cbl-b在胃癌组织中的表达与胃癌的病理分期和淋巴结是否转移呈明显正相关; c-Cbl和Cbl-b在胃癌组织中的表达呈正相关.
引文著录: 李向阳, 卢文杰, 朱琼琼. c-Cbl和Cbl-b在胃癌组织中的表达及其临床意义. 世界华人消化杂志 2015; 23(22): 3526-3531
Revised: June 16, 2015
Accepted: June 24, 2015
Published online: August 8, 2015
AIM: To detect the expression of c-Cbl and Cbl-b in gastric cancer and to analyze their clinical significance.
METHODS: One hundred gastric cancer surgical resection specimens collected between January 2012 and December 2014 were included in an observation group, and 20 adjacent normal gastric tissues were included in a control group. The two groups of specimens were used for preparation of tissue chip. The expression of c-Cbl and Cbl-b was detected by immunohistochemical method, and the relationship between c-Cbl and Cbl-b expression and clinical and pathological features of gastric cancer was analyzed.
RESULTS: The positive rates of c-Cbl and Cbl-b in the observation group were 72% and 83%, respectively, which were significantly higher than those in the control group (20% and 25%, respectively). c-Cbl expression had a significant positive correlation with tumor stage and depth of invasion. The expression of Cbl-b was significantly positively correlated with tumor stage and lymph node metastasis. c-Cbl expression was positively correlated with Cbl-b expression in gastric cancer (P < 0.05). There were 29 cases of specimens that were strongly positive for both proteins, and the clinical and pathological characteristics of these patients were mainly late stage, increased number of metastatic lymph nodes, deep tumor infiltration and poor differentiation.
CONCLUSION: The expression of c-Cbl and Cbl-b increases in the development and invasion of gastric cancer, and the detection of c-Cbl and Cbl-b expression has clinical significance and value for clinical diagnosis of gastric cancer.
- Citation: Li XY, Lu WJ, Zhu QQ. Clinical significance of expression of c-Cbl and Cbl-b in gastric cancer. Shijie Huaren Xiaohua Zazhi 2015; 23(22): 3526-3531
- URL: https://www.wjgnet.com/1009-3079/full/v23/i22/3526.htm
- DOI: https://dx.doi.org/10.11569/wcjd.v23.i22.3526
作为CBL家族的重要成员, c-Cbl和Cbl-b具有E3泛素连接酶功能与连接体功能, 可以靶向并降解以表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor, EGFR)为代表的受体蛋白(具有酪氨酸激酶活性), 使机体维持稳态[1-3]. 但是, 目前关于c-Cbl和Cbl-b在胃癌中表达的研究较少, 所以我们通过构建胃癌组织芯片, 采用免疫组织化学链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶(SP)法, 对胃癌中两种蛋白质的表达情况进行了检测, 并探讨了其临床意义, 现进行如下报道.
选取2012-1/2014-12河南医学高等专科学校附属医院经手术切除得到了胃癌组织标本100例, 将其设为观察组, 包括男75例, 女25例; 年龄23-81岁, 平均58.3岁±5.4岁; 细胞类型的病理分类均为腺癌, 分化程度: 低分化69例、中分化23例、高分化8例; 浸润深度: T1共2例、T2共59例、T3共33例、T4共6例; 胃癌分期: Ⅰ期13例、Ⅱ期36例、Ⅲ期31例、Ⅳ期20例; 发生远处转移4例, 淋巴结发生转移者85例. 所有患者术前均没有进行免疫治疗、化疗及放疗. 在100例胃癌组织中选取20例与胃癌组织距离较远(>5 cm)的正常组织, 将其设为对照组, 两组标本的来源(包括患者的性别、年龄、文化程度、疾病发展情况等)差异无统计学意义(P>0.05), 可行组间对比. 福建买新生物技术开发有限公司生产的DAB显色液、SP检测试剂盒; Santa Cruz公司生产的鼠抗人Cbl-b单克隆抗体; BD公司生产的鼠抗人c-Cbl单克隆抗体; 上海芯超生物科技有限公司提供的组织芯片制作技术.
1.2.1 免疫组织化学SP法: 采用对照组的20例癌旁正常胃组织标本与100例胃癌组织标本制作组织芯片, 制作步骤主要有以下几点: 首先, 由病理专家复诊并定位存档蜡块的组织, 采用组织阵列仪以0.6 mm直径进行打孔, 每块取得两块材料即可, 将其制为阵列块; 其次, 利用切片机以4 μm厚度为单位进行连续切片; 最后, 经过捞片和烤片后二次复诊, 制成数张组织芯片, 以备免疫组织化学染色之用. 通过免疫组织化学SP法, 根据试剂盒说明书, 依次完成实验步骤.
1.2.2 评价指标: Cbl-b与c-Cbl阳性染色的标志均为有棕黄色颗粒出现于胞浆和/或包膜中, 在不了解标本临床信息的情况下, 读片者随机在400倍视野下选择5个不同的视野, 根据每个视野的显色强度及阳性细胞比例确定其得分. 显色强度: 棕褐色为3分, 棕黄色为2分, 浅黄色为1分, 未着色为0分. 阳性细胞比例: >75%为4分, 51%-75%为3分, 26%-50%为2分, 6%-25%为1分, ≤5%为0分. 将两项分数相乘的结果即为视野得分, 分别求得5个视野的分数后, 最后总分需要取其平均值. 最后根据得分进行等级划分. ≥8分为(+++), 5-7分为(++), 2-4分为(+), 0-1分为(-), 其中(++)-(+++)表示阳性, (+)表示弱阳性, (-)表示阴性. 弱阳性与阳性例数之和与总例数的比即为阳性率[4-7].
统计学处理 本次研究中对数据进行分析与处理时采用的统计学软件为SPSS18.0, 计数资料采用百分比的方式表示, 其组间比较采用χ2检验, 计量资料采用mean±SD的方式表示, 其组间比较采用t进行检验. 采用Spearman等级相关分析进行c-Cbl和Cbl-b在胃癌组织中表达的相关性分析[8,9]. P<0.05表示差异具有统计学意义.
c-Cbl和Cbl-b均在胞膜和/或胞浆处阳性染色, 显示为均匀一致的棕黄色颗粒. c-Cbl在胃癌组织中呈阳性者72例, 阳性率为72.0%, Cbl-b在胃癌组织中呈阳性者83例, 阳性率为83.0%. 在对照组中, c-Cbl呈阳性者4例, 阳性率为20.0%, Cbl-b呈阳性者5例, 阳性率为25.0%. c-Cbl和Cbl-b在对照组中的表达均低于观察组(P<0.05)(图1).
经过统计, c-Cbl在胃癌组织中的表达与淋巴结是否转移、分化程度、年龄和性别无关, 与胃癌的病理分期和浸润深度呈明显正相关, 其表达量随着病理分期加重、浸润深度加深而增加. Cbl-b在胃癌组织中的表达与胃癌浸润深度、分化程度、年龄和性别无关, 与胃癌的病理分期和淋巴结是否转移呈明显正相关, 其表达量随着病理分期加重、淋巴结发生转移而增加(表1).
| 病理特征 | n | c-Cbl的表达 | P值 | Cbl-b的表达 | P值 | ||
| 阴性率 | 阳性率 | 阴性率 | 阳性率 | ||||
| 合计 | 100 | 28.0 | 72.0 | 17.0 | 83.0 | ||
| 年龄(岁) | 0.075 | 0.074 | |||||
| ≤60 | 58 | 27.6 | 73.3 | 15.5 | 84.5 | ||
| >60 | 42 | 28.6 | 71.4 | 19.0 | 81.0 | ||
| 性别 | 0.061 | 0.065 | |||||
| 男 | 75 | 26.7 | 73.3 | 14.7 | 85.3 | ||
| 女 | 25 | 32.0 | 68.0 | 24.0 | 76.0 | ||
| 胃癌分期 | 0.025 | 0.022 | |||||
| Ⅰ, Ⅱ | 49 | 49.0 | 51.0 | 30.6 | 69.4 | ||
| Ⅲ, Ⅳ | 51 | 7.8 | 92.2 | 3.9 | 96.1 | ||
| 淋巴结是否转移 | 0.059 | 0.047 | |||||
| 是 | 85 | 27.1 | 72.9 | 12.9 | 84.7 | ||
| 否 | 15 | 33.3 | 66.7 | 33.3 | 73.3 | ||
| 浸润深度 | 0.037 | 0.064 | |||||
| T1, T2 | 61 | 37.7 | 62.3 | 19.7 | 77.0 | ||
| T2, T4 | 39 | 12.8 | 87.2 | 12.8 | 92.3 | ||
| 分化程度 | 0.088 | 0.057 | |||||
| 高、中 | 31 | 25.8 | 74.2 | 9.7 | 92.3 | ||
| 低 | 69 | 29.0 | 71.0 | 20.3 | 79.7 | ||
Spearman等级相关分析结果显示, c-Cbl和Cbl-b在胃癌组织中的表达呈正相关(r = 0.205, P = 0.033), 两种蛋白同时呈强阳性表达者29例, 病例的临床病理特征主要是分期晚、淋巴结转移数目多、肿瘤组织浸润程度深和分化程度差.
近几年, 作为我国常见的恶性肿瘤之一, 胃癌的发病率逐年升高, 严重影响了患者的生命健康, 特别是中老年人, 使患者的生活质量下降, 生存期缩短. 大部分患者在胃癌早期时无明显症状, 随着胃癌发展才逐渐表现出恶心、呕吐、上腹不适等症状, 在就诊时已经发展至中晚期, 难以实施手术治疗. 了解胃癌的发病机制, 尽早确诊并实施治疗措施, 是保障胃癌患者生命健康的重要途径[10-16].
本次研究中制备了组织微阵列(即组织芯片), 较常规病理切片, 组织芯片具有高通量、省时、可靠及经济性等特点. 高通量是芯片上可以分析上百种的同一或不同疾病组织标本, 获取的生物学信息巨大; 一次完成组织的观察检测与分析, 比传统切片要省时; 同一条件下进行的微阵列观察, 结果会更加准确, 避免了批次误差; 同时少量试剂的应用更能提高经济性.
机体中活化的人嗜酸粒细胞趋化因子受体(eosinophil chemotactic factor receptor, ECFR)可以募集Cbl-b和c-Cbl, 使其泛素化, 并且和Eondophilin、CIN85共同形成内化复合物, 经过内化作用后进到多泡体中, 并且在溶酶体中被降解. 目前国内外学者对于Cbl-b和c-Cbl在胃癌组织中的表达并没有过多研究. 有关报道[17-19]显示, Cbl-b和c-Cbl能够抑制受体酪氨酸激酶的信号, 从而使其信号下调. 但是这两种蛋白也可能对肿瘤细胞的浸润过程有促进作用, 在结合CIN85的SH3结构域时, Cbl-b和c-Cbl主要是在表皮细胞生长因子(epidermal growth factor, EGF)的诱导下酪氨酸磷酸化, 当对Cbl-b和c-Cbl的作用进行抑制后, 胃癌组织中部分细胞的浸润活性也会因此而受到抑制, 将Cbl-b和c-Cbl基因敲除也可以对降解基质过程发挥抑制作用[20-23]. 因此, Cbl-b和c-Cbl蛋白很可能在癌细胞的浸润过程中发挥了作用.
本次研究结果显示, c-Cbl和Cbl-b在胃癌组织中的阳性率分别为72.0%与83.0%, 均大于正常组织(阳性率分别为20.0%与25.0%); c-Cbl在胃癌组织中的表达与胃癌的病理分期和浸润深度呈明显正相关, 其表达量随着病理分期加重、浸润深度加深而增加. Cbl-b在胃癌组织中的表达与胃癌的病理分期和淋巴结是否转移呈明显正相关, 其表达量随着病理分期加重、淋巴结发生转移而增加; c-Cbl和Cbl-b在胃癌组织中的表达呈正相关(P<0.05), 两种蛋白同时呈强阳性表达者29例, 病例的临床病理特征主要是分期晚、淋巴结转移数目多、肿瘤组织浸润程度深和分化程度差[24,25].
李琳琳等[26]为了探讨c-Cbl与成纤维生长因子受体(fibroblast growth factor receptor, FGFR)2在胃癌组织中的表达和临床意义, 进行了胃癌组织芯片构建, 通过免疫组织化学SP法, 对两种蛋白表达的情况进行检测. 结果显示, 胃癌组织中, c-Cbl与FGFR2的阳性表达率氛围是71.0%与77.4%. c-Cbl的表达和淋巴结转移、分化程度、年龄、性别无关, 与病理分期和浸润深度有关, 最终得到了c-Cbl与FGFR2蛋白的表达程度与病理分期和浸润深度呈正相关, 与本次研究的结果相符.
胃癌的发展与侵袭会增加c-Cbl和Cbl-b表达的阳性率, 这两种蛋白质的联合检测对于胃癌的临床诊断和恶性程度判断有一定的指导意义, 可以为临床医师提供参考[27-30]. c-Cbl和Cbl-b二者间存在明显的正相关, 在淋巴结转移、肿瘤浸润、胃癌细胞增殖等方面可能发挥了协同作用, 对其进行检测有助于深入分析胃癌的生物学行为, 值得在临床上进行推广.
c-Cbl和Cbl-b是CBL家族的重要成员, 具有E3泛素连接酶功能与连接体功能, 可以靶向并降解以表皮生长因子受体为代表的受体蛋白(具有酪氨酸激酶活性), 使机体维持稳态. 对胃癌患者进行c-Cbl和Cbl-b表达检测, 可以更好的判断患者恶性程度.
郑丽端, 副教授, 副主任医师, 华中科技大学同济医学附属协和医院
c-Cbl和Cbl-b表达阳性率联合的检测对于胃癌的临床诊断和恶性程度判断有一定的指导意义, 可以为临床医师提供参考. 研究的热点应侧重各项因子的表达情况.
李琳琳等为了探讨c-Cbl与FGFR2在胃癌组织中的表达和临床意义, 进行了蛋白表达的情况检测, 结果显示c-Cbl与FGFR2的阳性表达率氛围是71.0%与77.4%. c-Cbl的表达和淋巴结转移、分化程度、年龄、性别无关.
目前国内外学者对于Cbl-b和c-Cbl在胃癌组织中的表达并没有过多研究. 有关报道显示, Cbl-b和c-Cbl能够抑制受体酪氨酸激酶的信号, 下调信号.
组织芯片: 组织微阵列, 可以分析上百种同一或不同疾病组织标本, 获取生物学信息巨大, 具有高通量、省时、可靠及经济性等特点; E3泛素连接酶: 能够将泛素分子连接到目的蛋白质的某个赖氨酸上的酶.
本文通过免疫组织化学方法检测了c-Cbl和Cbl-b在20例癌旁正常胃组织、100例胃癌组织标本中的表达, 并探讨了他们与临床病理特征间的关系, 对于胃癌的临床诊断和恶性程度判断有一定的指导意义.
编辑: 韦元涛 电编:闫晋利
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