临床经验 Open Access
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世界华人消化杂志. 2009-08-28; 17(24): 2518-2521
在线出版日期: 2009-08-28. doi: 10.11569/wcjd.v17.i24.2518
RKIP在胆囊癌中的表达及临床意义
谈燚, 孟海萍, 吴斌全, 吴浩荣
谈燚, 吴浩荣, 苏州大学附属第二医院普外科 江苏省苏州市 215004
孟海萍, 吴斌全, 蚌埠医学院附属第一医院检验科 安徽省蚌埠市 233004
作者贡献分布: 此课题由谈燚与吴浩荣共同设计; 研究过程由谈燚, 孟海萍及吴斌全共同完成; 数据分析与论文写作由谈燚完成.
通讯作者: 吴浩荣, 教授, 215004, 江苏省苏州市, 苏州大学附属第二医院普外科. tmjtx2009@163.com
电话: 0512-67783303
收稿日期: 2009-06-29
修回日期: 2009-08-14
接受日期: 2009-08-17
在线出版日期: 2009-08-28

目的: 探讨胆囊癌中Raf激酶抑制蛋白(RKIP)的表达状况及其与胆囊癌临床病理指标和预后的可能关系.

方法: 2006-01/2009-06苏州大学附属第二医院胆囊癌患者50例, 外科手术切除术后病理证实的存档组织蜡块. 所有病例术前未进行放化疗, 有完整的临床病理资料. 采用免疫组织化学Elivision Plus法, 对50例原发性胆囊癌与38例慢性胆囊炎组织中RKIP表达进行检测.

结果: 在胆囊癌组织中表达的阳性率明显高于慢性胆囊炎组织, 差异有统计学意义(74.0% vs 0.8%, P<0.01). RKIP表达水平与胆囊癌患者年龄、性别、组织学类型及是否伴有结石等因素均无明显关系(P>0.05), 但RKIP高表达与胆囊癌的低分级(31.8% vs 92.3%, P<0.05)、淋巴结或远处转移(75.0% vs 100.0%, P<0.05)以及术后生存时间减少(50.0% vs 93.8%, P<0.05)有明显关系.

结论: RKIP在胆囊癌中高表达可能提示其在胆囊癌的发生、发展中起重要作用.

关键词: 胆囊肿瘤; Raf激酶抑制蛋白; 免疫组织化学法
引文著录: 谈燚, 孟海萍, 吴斌全, 吴浩荣. RKIP在胆囊癌中的表达及临床意义. 世界华人消化杂志 2009; 17(24): 2518-2521
Expression of RKIP and its clinical significance in gallbladder carcinoma
Yi Tan, Hai-Ping Meng, Bin-Quan Wu, Hao-Rong Wu
Yi Tan, Hao-Rong Wu, Department of General Surgery, Second Affiliated Hospital of Soochow University, Suzhou 210029, Jiangsu Province, China
Hai-Ping Meng, Bin-Quan Wu, Department of Clinical Laboratory, First Hospital Affiliated to Bengbu Medical College, Bengbu 233000, Anhui Province, China
Correspondence to: Hao-Rong Wu, Department of General Surgery, Second Affiliated Hospital of Soochow University, Suzhou 215004, Jiangsu Province, China. tmjtx2009@163.com
Received: June 29, 2009
Revised: August 14, 2009
Accepted: August 17, 2009
Published online: August 28, 2009

AIM: To investigate the expression of Raf kinase inhibitory protein (RKIP) in gallbladder carcinoma and to explore its possible relationship with clinicopathological parameters and prognosis of gallbladder carcinoma.

METHODS: RKIP expression was examined by streptavidin peroxidase immunohistochemical method on paraffin-embedded tissue specimens from 50 patients with gallbladder cancer and 38 with chronic cholecystitis who underwent surgical treatment between January 2006 and June 2009 in Suzhou University. None of these patients received preoperative treatment, and detailed clinicopathological information was provided.

RESULTS: The positive expression rate of RKIP in gallbladder carcinoma was significantly higher than in chronic cholecystitis, with statistically significant difference (74.0% vs 0.8%, P < 0.01). In gallbladder carcinoma, the expression of RKIP had no correlation with age, gender, histologic type and gallbladder stone (P > 0.05), but overexpression of RKIP correlated significantly with lower histological grading (31.8% vs 92.3%, P < 0.05), lymph node or distant metastasis (75.0% vs 100.0%, P < 0.05), and shorter survival after operation (50.0% vs 93.8%, P < 0.05).

CONCLUSION: RKIP is overexpressed in development of gallbladder carcinoma. RKIP may play an important role in tumor progression of human gallbladder carcinoma.

Key Words: Gallbladder carcinoma; Raf kinase inhibitory protein; Immunohistochemistry
0 引言

Raf激酶抑制蛋白(raf kinase inhibitor protein, RKIP)广泛存在于各种不同的生物中, 1999年Yeung et al[1]发现其可以与Raf-1结合, 从而抑制Raf-1/MEK/ERK信号通路, 将其命名为RKIP, 进一步研究发现RKIP还参与了对核因子κB(nuclear factor-κB, NF-κB)信号通路和G蛋白偶联受体信号通路的调控. 2003年Fu et al[2]发现RKIP可以抑制肿瘤细胞转移, 使其成为抗肿瘤领域一个新的热点. 我们采用免疫组织化学法分析了胆囊癌组织中RKIP的表达及其与临床病理指标和预后的关系.

1 材料和方法
1.1 材料

2006-01/2009-06苏州大学附属第二医院胆囊癌患者50例, 男20例, 女30例; 年龄30-76岁, 其中>60岁32例, <60岁18例. 外科手术切除术后病理证实的存档组织蜡块. 所有病例术前未进行放化疗, 有完整的临床病理资料. 组织学类型: 腺癌43例, 腺鳞癌3例, 鳞癌4例. 病理分级: 高分化(Ⅰ级)11例, 中分化(Ⅱ级)23例, 低分化(Ⅲ级)16例. 按Nevin临床分期: Ⅰ期1例, Ⅱ期7例, Ⅲ期12例, Ⅳ期11例, V期19例. 根据术中探查及病理报告结果: 有淋巴结或远处转移30例, 无转移20例. 合并有胆囊结石25例, 无结石25例. 另外选取38例慢性胆囊炎组织标本作为对照组; 即用型兔抗人RKIP多克隆抗体购自美国Santa Cruz公司; 广谱型Elivision Plus试剂盒、DAB显色剂(均购自福州迈新生物技术有限公司).

1.2 方法

1.2.1 随访患者: 通过电话调查、信件随访及入户调查的方式了解50例胆囊癌患者从手术之日起1年内是否存活、存活时间及其死亡原因.

1.2.2 免疫组织化学染色: 将每例石蜡块用组织切片机做成4 μm厚的连续组织切片4张, 1张作苏木精-伊红(HE)染色, 余作免疫组织化学染色. 以已知正常乳腺组织阳性切片作阳性对照, 以PBS代替一抗作为阴性对照. RKIP采用柠檬酸微波抗原修复方法, 免疫组织化学染色具体步骤按Elivision Plus试剂盒说明书进行操作, 以胞质或胞膜出现棕黄色颗粒视为阳性细胞, 结果判断根据Hao et al[3]的方法.

统计学处理 应用SPASS13.0统计软件进行分析. χ2检验分析P<0.05表明有显著性差异.

2 结果
2.1 随访患者

50例中有25例获得完整随访资料, 结果存活1年以上的有8例, 1年内死于肿瘤者16例, 1年生存率为32.0%.

2.2 胆囊良恶性病变组织中RKIP的表达

RKIP阳性染色主要位于胞质. 慢性胆囊炎和胆囊癌患者组织中RKIP阳性表达与表达率分别为37/50和3/38与0.8%和74.0%, 胆囊癌组与慢性胆囊炎组差异有统计学意义(χ2 = 38.05, P<0.01). RKIP主要位于胞质(图1).

图1
图1 组织中RKIP表达(magnification×100). A: 胆囊癌组织中强阳性; B: 胆囊炎组织中阴性.
2.3 RKIP表达与胆囊癌临床病理参数

RKIP表达随着癌组织病理分级的增高, 阳性表达率逐渐增高, 差异有统计学意义(P<0.05); 有淋巴结或远处转移组的阳性表达率明显高于无转移组(P<0.05); 术后1年内死亡组的阳性率亦高于术后生存期超过1年组(P<0.05). 但RKIP表达与胆囊癌患者年龄、性别、组织学类型以及是否伴有结石等因素无明显相关性(表1).

表1 胆囊癌临床病理参数与RKIP表达的关系.
临床病理参数PEBP1阳性表达(%)χ2值P值
性别
男16/18(88.9)0.09>0.05
女29/32(90.6)
年龄(岁)
<6018/20(90.0)0.23>0.05
≥6027/30(90.0)
组织学类型
腺癌39/43 (90.7)0.01>0.05
非腺癌5/7(71.4)
是否伴有结石
有结石21/25(84.0)0.89>0.05
无结石24/25(96.0)
病理分级
Ⅰ级4/11(31.8)<0.05
Ⅱ-Ⅲ级36/39(92.3)
Nevin临床分期
Ⅰ-Ⅱ期4/7(57.1)0.0481
Ⅲ-Ⅴ期39/43(95.3)
淋巴结或远处转移
有转移30/30(100.0)5.79<0.05
无转移15/20(75.0)
术后生存时间(年)
<115/16(93.8)0.0281
≥14/8(50.0)
1: 使用确切概率法.
3 讨论

原发性胆囊癌的发病率在消化系肿瘤中占第5位, 死亡率占第9位, 其恶性程度高, 起病隐匿, 早期诊断不易, 且容易合并周围脏器侵犯和淋巴转移, 临床治疗效果差[4]. 近年来, 其发病率有上升的趋势. 虽然临床诊断技术不断进步, 胆囊癌检出率逐年升高, 但是总体诊断率仍然低下. 为此, 我们必须寻找更加精确、有效的分子标志物, 以期早期发现肿瘤.

最近研究发现RKIP能抑制前列腺癌[2]、乳癌[5]、肝癌[6]等多种恶性肿瘤转移, 其具体机制可能与抑制Raf-1/MEK/ERK或NF-κB信号转导途径有关. Fu et al[2]用免疫组织化学方法检测发现前列腺癌患者原发病灶的病理标本中有RKIP的表达, 但在转移前列腺的病理标本无RKIP的表达; 进一步对转染了含RKIP cDNA的质粒的LNCaP和C4-2B细胞进行研究, 发现在体外RKIP的表达与前列腺癌细胞的浸润呈负相关: 在转移的肿瘤细胞中增加RKIP的表达, 能减弱体外浸润能力, 而在非转移的癌细胞中减少RKIP表达能增强他们的体外浸润. Hagan et al[5]检测了103例乳腺癌患者的病理标本中的RKIP, 发现在乳腺癌的原发病灶中有一定表达, RKIP的表达与乳腺癌的类型、分化程度、肿瘤大小、ER的表达无关, 但在转移淋巴结中低表达或无表达. Lee et al[6]发现RKIP在肝癌中的表达明显低于邻近的正常肝组织, 增加RKIP的表达可以减少肝癌细胞的增殖和迁移. 相似的结果亦见于肺癌及黑色素瘤的研究[7-8]. 目前, 多数的研究发现[9-10]: RKIP的表达在正常组织中高于肿瘤组织中, 在肿瘤组织中原发灶高于转移灶, RKIP的低表达或缺失的肿瘤转移性、侵袭性强, 预后差. 故认为RKIP是肿瘤转移抑制基因. 但亦有相反的研究结果, Zhu et al[11]发现RKIP具有促进细胞迁移的作用. 他们在对狗肾传代细胞(madin-darby canine kidney, MDCK)上皮细胞进行研究时发现, RKIP是细胞迁移抑制因子locostatin的底物. 迄今发现locostatin是唯一的RKIP抑制因子, 他可以破坏RKIP结合并抑制Raf-1激酶的能力. siRNA介导的RKIP表达沉默可减弱细胞迁移率, 而过表达RKIP则导致细胞呈现高迁移的表型, 并降低了对locostatin的敏感性, 在MDCK上皮细胞中过表达RKIP能促进细胞迁移. Zhang et al[12]报道RKIP能抑制胰小岛β细胞的增殖, 抑制细胞周期的进程. RKIP还能促进肿瘤细胞凋亡[13]. 这些不同的实验结果表明RKIP可能在调控细胞迁移中存在不同作用方式, 可能是依赖不同的上下游因子, 从而导致了RKIP在不同的肿瘤类型中通过不同的方式促进或者抑制肿瘤的浸润和转移.

本研究首次应用免疫组织化学方法发现胆囊癌组织中RKIP的表达明显高于胆囊良性组织. RKIP高表达与胆囊癌的低分级、淋巴结或远处转移以及术后生存时间减少有明显关系(P<0.05), 表明RKIP具有潜在致癌活性. RKIP有可能是胆囊癌的一个新的治疗靶点. 鉴于RKIP广泛的生物学效应及在肿瘤生长及转移中的重要作用, 我们正在对其在胆囊癌中的作用机制进行进一步的研究.

评论
背景资料

原发性胆囊癌的发病率在消化系肿瘤中占第5位, 死亡率占第9位, 其恶性程度高, 起病隐匿, 早期诊断不易, 且容易合并周围脏器侵犯和淋巴转移, 临床治疗效果差. 近年来, 其发病率有上升的趋势. 虽然临床诊断技术不断进步, 胆囊癌检出率逐年升高, 但是总体诊断率仍然低下. 为此, 人们必须寻找更加精确、有效的分子标志物, 以期早期发现肿瘤.

同行评议者

郭晓钟, 教授, 中国人民解放军沈阳军区总医院消化内科

研发前沿

RKIP可以抑制肿瘤细胞转移, 使其成为抗肿瘤领域一个新的热点. 本研究采用免疫组织化学法分析了胆囊癌组织中RKIP的表达及其与临床病理指标和预后的关系.

相关报道

多数的研究发现, RKIP的表达在正常组织中高于肿瘤组织中, 在肿瘤组织中原发灶高于转移灶, RKIP的低表达或缺失的肿瘤转移性、侵袭性强, 预后差. 故认为RKIP是肿瘤转移抑制基因.

创新盘点

本研究首次发现胆囊癌组织中RKIP的表达明显高于胆囊良性组织. RKIP高表达与胆囊癌的低分级、淋巴结或远处转移以及术后生存时间减少有明显关系, 表明RKIP具有潜在致癌活性. RKIP有可能是胆囊癌的一个新的治疗靶点.

同行评价

本研究选题尚可, 对临床医师有一定的参考价值.

编辑:李军亮 电编:何基才

1.  Yeung K, Seitz T, Li S, Janosch P, McFerran B, Kaiser C, Fee F, Katsanakis KD, Rose DW, Mischak H. Suppression of Raf-1 kinase activity and MAP kinase signalling by RKIP. Nature. 1999;401:173-177.  [PubMed]  [DOI]
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