临床经验 Open Access
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世界华人消化杂志. 2008-02-18; 16(5): 540-543
在线出版日期: 2008-02-18. doi: 10.11569/wcjd.v16.i5.540
胰腺癌中FXYD6蛋白的表达及临床意义
刘军桂, 周宁新, 夏洪天, 李成刚, 李亚卓, 李崇辉
刘军桂, 夏洪天, 李成刚, 李崇辉, 中国人民解放军总医院肝胆外科研究所 北京市 100853
周宁新, 中国人民解放军第二炮兵总医院肝胆胃肠研究所 北京市 100088
李亚卓, 中国人民解放军总医院病理科 北京市 100853
基金项目: 国家自然科学基金资助项目, No. 39970724.
作者贡献分布: 本课题由刘军桂, 周宁新设计; 研究过程由刘军桂, 夏洪天, 李成刚, 李崇辉操作完成; 实验试剂及实验设备由李亚卓提供; 数据分析由刘军桂, 李成刚完成; 论文写作由刘军桂, 夏洪天, 李成刚完成.
通讯作者: 周宁新, 100088, 北京市, 中国人民解放军第二炮兵总医院肝胆胃肠研究所. zhounx301@163.com
电话: 010-66936602
收稿日期: 2007-11-05
修回日期: 2008-01-02
接受日期: 2008-01-15
在线出版日期: 2008-02-18

目的: 探讨FXYD6蛋白在胰腺癌中的表达及临床意义.  

方法:  应用免疫组化法检测FXYD6蛋白在胰腺癌中的表达, 并分析其与临床病理因素的关系.  

结果: 47例胰腺癌病例中, FXYD6蛋白阳性表达42例, 阳性表达率为89.34%, 而正常胰腺组织中不表达或低表达, 两组相比有显著性差异(χ2 = 10.8631, P = 0.0125). 按FXYD6蛋白表达程度将47例胰腺癌病例分为高表达组和低表达组, 两组年龄、性别、肿瘤大小及远处转移之间的差异无统计学意义, 而肿瘤分化程度(χ2 = 11.562, P = 0.0031)、淋巴转移(χ2 = 4.1947, P = 0.0406)、TNM分期(χ2 = 9.5995, P = 0.0223)之间的差异有显著统计学意义, 肿瘤分化程度低、出现淋巴转移、TNM分期为Ⅲ-Ⅳ期的胰腺癌组织中FXYD6蛋白表达明显增高. Spearman等级相关分析显示, FXYD6蛋白表达程度与肿瘤大小(r = 0.2991)、分化程度(r = 0.6980)、淋巴转移(r = 0.4971)、远处转移相关(r = 0.4967).

结论:  FXYD6蛋白在胰腺癌发病机制中发挥重要作用.

关键词: 胰腺癌; 免疫组织化学; FXYD6蛋白
引文著录: 刘军桂, 周宁新, 夏洪天, 李成刚, 李亚卓, 李崇辉. 胰腺癌中FXYD6蛋白的表达及临床意义. 世界华人消化杂志 2008; 16(5): 540-543
Expression of FXYD6 in pancreatic adenocarcinoma and its clinical significance
Jun-Gui Liu, Ning-Xin Zhou, Hong-Tian Xia, Cheng-Gang Li, Ya-Zhuo Li, Chong-Hui Li
Jun-Gui Liu, Hong-Tian Xia, Cheng-Gang Li, Chong-Hui Li, Institute of Hepatobiliary Surgery, General Hospital of Chinese PLA, Beijing 100853, China
Ning-Xin Zhou, Institute of Hepatobiliary and Gastrointestinal Surgery, the Second Artillery Fprces General Hospital of Chinese PLA, Beijing 100088, China
Ya-Zhuo Li, Department of Pathology, General Hospital of Chinese PLA, Beijing 100853, China
Supported by: National Natural Science Foundation of China, No. 39970724.
Correspondence to: Ning-Xin Zhou, Institute of Hepatobiliary and Gastrointestinal Surgery, the Second Artillery Forces General Hospital of Chinese PLA, Beijing 100088, China. zhounx301@163.com
Received: November 5, 2007
Revised: January 2, 2008
Accepted: January 15, 2008
Published online: February 18, 2008

AIM: To investigate the expression of FXYD6 in pancreatic carcinoma and its clinical significance.

METHODS: Immunohistochemistry was used to detect the expression of FXYD6. The relation between the expression of FXYD6 and the clinical pathological factors was analyzed.

RESULTS: FXYD6 was expressed in 42 of 47 pancreatic carcinoma tissue samples. The positive expression rate of FXYD6 in 47 pancreatic cancer tissue samples was 89.34% (42/47). Compared to the expression of FXYD6 in normal pancreatic tissue samples, the expression of FXYD6 in pancreatic carcinoma tissue samples had a statistically significant difference (χ2 = 10.8631, P = 0.0125). According to the FXYD6 expression level, 47 patients were divided into high expression group and low expression group. There was no statistically significant difference in age, gender, tumor size and distant metastasis between the two groups, while there were statistical significances in tumor-differentiation degree(χ2 = 11.562, P = 0.0031), lymphatic metastasis (χ2 = 4.1947, P = 0.0406), TNM staging (χ2 = 9.5995, P = 0.0223). The expression level of FXYD6 protein was related to tumor size (r = 0.2991), differentiation degree (r = 0.6980), lymphatic metastasis (r = 0.4971) and distant metastasis (r = 0.4967).

CONCLUSION: FXYD6 protein plays an important role in the development and progression of pancreatic cancer.

Key Words: Pancreatic carcinoma; Immunohistochemistry; FXYD6 protein
0 引言

FXYD6(FXYD domain-containing ion transport regulator 6, FXYD6)是一种新近发现的离子通道相关的单跨膜小分子蛋白. 我们在前期的研究中发现FXYD6蛋白在胆管癌的演变过程中发挥重要作用[1-2], 鉴于胰腺和肝外胆管有着共同的胚胎学起源, 发生于这些部位的胰腺导管上皮癌和胆管癌具有相似的组织学特征, 我们推测FXYD6蛋白在胰腺癌的发生和发展中也可能具有重要的作用. 本研究旨在通过检测FXYD6蛋白在胰腺癌中的表达情况, 初步探讨其临床意义.

1 材料和方法
1.1 材料

收集2006-01/2006-11中国人民解放军总医院肝胆外科因胰头导管腺癌行胰十二指肠切除手术的标本47例, 所有标本均经病理学证实, 其中男28例, 女19例, 年龄26-71(平均54.1)岁. 术前未经过任何化疗和放疗. 临床病理特征按年龄、性别、肿瘤大小、淋巴转移、远处转移、肿瘤分化程度和临床分期进行分组, 临床分期采用胰腺癌TNM分期. 正常胰腺组织6例, 男5例, 女1例, 年龄21-56(平均43.2)岁, 由我科器官移植供体获得. FXYD6兔抗人多克隆抗体由本课题组前期研究制备, 通用型二步法免疫组化检测试剂盒由福建迈新生物技术公司提供.

1.2 方法

采用PV 6000二步法检测FXYD6蛋白的表达. 标本经40 g/L甲醛固定, 石蜡包埋, 4 μm连续切片, 常规脱蜡、枸橼酸盐抗原修复, 滴加内源性过氧化物酶阻断剂室温孵育10 min, 滴加一抗FXYD6(1:100), 4 ℃过夜, 滴加通用型IgG抗体37 ℃孵育30 min, DAB显色, 苏木精复染, 中性树胶封片后镜下观察. 以PBS代替一抗作为阴性对照. 以胞质和(或)胞膜出现明显的深棕色或棕黄色颗粒为FXYD6染色阳性. 每例标本随机取2张切片进行高倍镜观察(×400), 每张切片分别随机选10个视野, 每个视野计数100个肿瘤细胞中的染色阳性细胞数, 计算阳性细胞平均百分数, 并根据肿瘤细胞中FXYD6蛋白染色的范围, 将染色分为"0-3+"4级(3+: >50%; 2+: 10%-50%; +: <10%; 0: 无染色). "2+"与"3+"级归为高表达组, "0"与"+"归为低表达组.

统计学处理 应用SPSS13.0统计分析软件进行数据分析, 包括χ2检验或Fisher确切概率检验, 并进行Spearman等级相关分析.

2 结果
2.1 FXYD6蛋白在正常胰腺组织、胰腺癌中的表达

FXYD6蛋白棕黄色染色颗粒位于胞膜和(或)胞质, 以胞膜为主. 胰腺癌中FXYD6呈阳性表达, 阳性表达率为89.34%(42/47), 正常胰腺组织中不表达或微弱表达, 两种组织中的表达程度差异有显著统计学意义(χ2 = 10.8631, P = 0.0125)(表1).

表1 FXYD6蛋白在正常胰腺和胰腺癌中的表达.
分组nFXYD6(n)
P
-++++++
胰腺癌4751318110.0125
正常胰腺8 3500
2.2 FXYD6蛋白表达与临床病理特征之间的关系

FXYD6低表达组与高表达组之间, 年龄、性别、肿瘤大小及远处转移的差异无统计学意义(χ2 = 0.1325, 1.1634, 3.1006, 1.0475; P = 0.7159, 0.2808, 0.0783, 0.3061), 而肿瘤分化程度、淋巴转移、TNM分期的差异有统计学意义(χ2 = 11.562, 4.1947, 9.5995; P = 0.0031, 0.0406, 0.0223)(表2). Spearman等级相关分析显示, FXYD6蛋白表达程度与肿瘤大小、分化程度、淋巴转移、远处转移相关(r = 0.2991, 0.6980, 0.4971, 0.4967; P<0.05).

表2 FXYD6蛋白表达与胰腺癌临床病理特征的关系.
临床病理因素FXYD6
χ2P
低表达(n)高表达(n)
年龄≤60岁9230.13250.7159
>60岁510
性别男10181.16340.2808
女415
肿瘤大小≤3 cm9123.10060.0783
>3 cm521
淋巴转移有1124.19470.0406
无1321
远处转移有051.04750.3061
无1428
分化程度高1011.5620.0031
中1314
低119
TNM分期Ⅰ3139.59950.0223
Ⅱ68
Ⅲ57
Ⅳ015
3 讨论

目前认为胰腺癌的发生发展是一个多基因、多步骤、多阶段的复杂过程, 在不同的发展阶段有不同的基因改变和肿瘤标志物的表达. 研究发现FXYD蛋白家族的多个成员在胰腺癌的发病机制中发挥着重要作用, 如FXYD3在胰腺癌中的表达不仅远远高于正常胰腺组织, 而且也高于慢性胰腺炎组织. 体外实验显示FXYD3的过表达可以增加胰腺癌组织的分裂增殖能力[3-5]; 另外FXYD5与胰腺癌的浸润及淋巴转移密切相关, FXYD5强阳性表达被认为是两个独立危险预后因素之一, 其作用机制可能是通过影响E-钙黏蛋白实现的[6-7].

FXYD6蛋白是FXYD家族新成员, 其mRNA由Yamaguchi et al[8]首先在大鼠脑和肾脏中克隆获得. 染色体比较基因组杂交结果表明, 11号染色体长臂是包括胆管癌、胰腺癌在内的多种肿瘤细胞最常见的异常区域[9], 主要表现为11号染色体长臂的部分或全部获得, 而人fxyd6基因正是定位于11号染色体长臂(11q23.3). 初步的研究表明FXYD6只在脑中表达, 并作用于成年大鼠中枢神经元的兴奋. 我们前期发现, 从正常胆管上皮细胞、高分化胆管癌细胞到低分化胆管癌细胞, FXYD6 mRNA含量依次递增, 其表达与胆管癌分化程度呈负性相关[10-12]; hFXYD6反义核酸可以明显抑制人胆管癌细胞的体外增殖能力, 推测FXYD6基因及其表达产物在胆管癌的发生和发展中可能具有重要的作用[2].

本实验研究显示FXYD6蛋白在胰腺癌组织中呈高表达, 而在正常胰腺组织中不表达或低表达, 提示FXYD6在胰腺癌的发病机制中发挥一定作用. 在对FXYD6蛋白与临床病理特征之间关系的分析中, 我们发现随着胰腺癌分化程度的由高到低, FXYD6蛋白免疫反应强度逐渐增强; 在出现淋巴转移的胰腺癌组织中, FXYD6蛋白表达也明显增强. 上述结果表明, FXYD6蛋白高表达者, 其肿瘤细胞的分化程度较差, 恶性程度较高, 易发生淋巴结转移, 这提示我们对于临床中FXYD6蛋白高表达的胰腺癌病例, 即使术中未见有明显的淋巴转移, 也要扩大手术范围, 进行周围淋巴清扫. 另外, 我们还发现不同TNM分期FXYD6蛋白的表达有明显的差异, Ⅱ-Ⅳ期胰腺癌组织中的FXYD6蛋白表达要明显高于在Ⅰ-Ⅱ期的表达, 因此术中测定FXYD6蛋白的表达程度有助于术中胰腺癌的正确分期, 对于手术方式及范围具有指导意义.

FXYD6蛋白与胰腺癌的发生、发展密切相关, 可能是一个潜在的肿瘤相关蛋白, 但是其作用机制还不是很清楚. 鉴于FXYD6是Na+/K+-ATP酶的组织特异性调节蛋白[13-16], 推测FXYD6可能通过调节Na+/K+-ATP酶的活性而影响肿瘤细胞的分化和增殖, 具体机制有待于进一步探讨.

评论
背景资料

胰腺癌发病率在世界范围内呈明显上升趋势, 在美国和日本其病死率占全部肿瘤病死率的第4位, 也是我国十大恶性肿瘤之一. 胰腺癌早期缺乏敏感及特异性的诊断方法, 不易被早期发现, 一旦临床确诊, 多属中晚期, 手术切除率低. FXYD6是一种新近发现的离子通道相关的单跨膜小分子蛋白, 由于其对肿瘤的作用机制尚不清楚, 是否可以作为肿瘤早期诊断的分子标志物还需要进一步研究.

同行评议者

沈柏用, 副教授, 上海交通大学医学院附属瑞金医院肝胆胰外科中心

创新盘点

本文应用免疫组化法检测FXYD6蛋白在胰腺癌中的表达, 并分析其与临床病理因素的关系.

应用要点

FXYD6蛋白可能是一个潜在的肿瘤相关蛋白, 其对于肿瘤临床分期的判断、手术方式的选择及手术范围具有指导作用.

同行评价

本研究设计科学, 统计方法合理, 结论可靠, 但结果不够具体, 讨论需进一步深入.

编辑: 李军亮 电编: 郭海丽

1.  万 涛, 倪 彬, 刘 建伟, 叶 玲, 周 宁新. 人胆管癌相关基因 CCR-L2/FXYD6大片段克隆与鉴定. 中华实验外科杂志. 2003;20:393-395.  [PubMed]  [DOI]
2.  窦 春青, 岳 鑫, 周 宁新. hFXYD6反义核酸对胆管癌细胞体外增殖和侵袭能力的影响. 世界华人消化杂志. 2007;15:929-935.  [PubMed]  [DOI]
3.  Kayed H, Kleeff J, Kolb A, Ketterer K, Keleg S, Felix K, Giese T, Penzel R, Zentgraf H, Büchler MW. FXYD3 is overexpressed in pancreatic ductal adenocarcinoma and influences pancreatic cancer cell growth. Int J Cancer. 2006;118:43-54.  [PubMed]  [DOI]
4.  Iacobuzio-Donahue CA, Maitra A, Olsen M, Lowe AW, van Heek NT, Rosty C, Walter K, Sato N, Parker A, Ashfaq R. Exploration of global gene expression patterns in pancreatic adenocarcinoma using cDNA microarrays. Am J Pathol. 2003;162:1151-1162.  [PubMed]  [DOI]
5.  Friess H, Ding J, Kleeff J, Fenkell L, Rosinski JA, Guweidhi A, Reidhaar-Olson JF, Korc M, Hammer J, Büchler MW. Microarray-based identification of differentially expressed growth- and metastasis-associated genes in pancreatic cancer. Cell Mol Life Sci. 2003;60:1180-1199.  [PubMed]  [DOI]
6.  Shimamura T, Yasuda J, Ino Y, Gotoh M, Tsuchiya A, Nakajima A, Sakamoto M, Kanai Y, Hirohashi S. Dysadherin expression facilitates cell motility and metastatic potential of human pancreatic cancer cells. Cancer Res. 2004;64:6989-6995.  [PubMed]  [DOI]
7.  Izumi T, Oda Y, Hasegawa T, Nakanishi Y, Iwasaki H, Sonobe H, Goto H, Kusakabe H, Takahira T, Kobayashi C. Prognostic significance of dysadherin expression in epithelioid sarcoma and its diagnostic utility in distinguishing epithelioid sarcoma from malignant rhabdoid tumor. Mod Pathol. 2006;19:820-831.  [PubMed]  [DOI]
8.  Yamaguchi F, Yamaguchi K, Tai Y, Sugimoto K, Tokuda M. Molecular cloning and characterization of a novel phospholemman-like protein from rat hippocampus. Brain Res Mol Brain Res. 2001;86:189-192.  [PubMed]  [DOI]
9.  Rijken AM, Hu J, Perlman EJ, Morsberger LA, Long P, Kern SE, Hruban RH, Yeo CJ, Griffin CA. Genomic alterations in distal bile duct carcinoma by comparative genomic hybridization and karyotype analysis. Genes Chromosomes Cancer. 1999;26:185-191.  [PubMed]  [DOI]
10.  张 效东, 周 宁新, 卢 柏松, 贾 熙华, 黄 培堂. 不同分化胆管癌差异表达基因的分离、克隆和功能研究. 中华外科杂志. 2002;40:399.  [PubMed]  [DOI]
11.  张 效东, 周 宁新, 卢 柏松, 贾 熙华, 黄 培堂. 不同分化胆管癌间差异表达基因的研究. 消化外科. 2002;1:13-15.  [PubMed]  [DOI]
12.  张 效东, 周 宁新, 卢 柏松, 黄 培堂. 应用基因芯片技术比较两种不同表型的胆管癌组织中基因表达的差异. 消化外科. 2002;1:181-184.  [PubMed]  [DOI]
13.  Delprat B, Bibert S, Geering K. [FXYD proteins: novel regulators of Na,K-ATPase]. Med Sci (Paris). 2006;22:633-638.  [PubMed]  [DOI]
14.  Geering K. FXYD proteins: new regulators of Na-K-ATPase. Am J Physiol Renal Physiol. 2006;290:F241-F250.  [PubMed]  [DOI]
15.  Geering K, Béguin P, Garty H, Karlish S, Füzesi M, Horisberger JD, Crambert G. FXYD proteins: new tissue- and isoform-specific regulators of Na,K-ATPase. Ann N Y Acad Sci. 2003;986:388-394.  [PubMed]  [DOI]
16.  Lindzen M, Gottschalk KE, Füzesi M, Garty H, Karlish SJ. Structural interactions between FXYD proteins and Na+,K+-ATPase: alpha/beta/FXYD subunit stoichiometry and cross-linking. J Biol Chem. 2006;281:5947-5955.  [PubMed]  [DOI]