TGF-α和Cyclin E在中医不同证型患者胃病变组织中的表达及相关性

摘要

目的: 探讨中医不同证型患者的慢性胃病变组织中TGF-α和Cyclin E表达的变化, 并分析两者表达的相关性.

方法: 慢性胃病患者(慢性良性胃病变和胃癌)135例, 按中医分为肝胃不和、脾胃虚寒、胃阴不足和寒热夹杂4种证型. 对患者慢性胃病变组织进行TGF-α和Cyclin E表达的免疫组化染色, 对两者在各中医证型中表达的阳性率进行比较, 并进一步分析TGF-α和Cyclin E表达的相关性.

结果: TGF-α在4种中医证型中表达的阳性率分别为25.0%、18.6%、47.1%和42.1%, 在胃阴不足型与脾胃虚寒型中的表达, 有显著性差异(P<0.05). Cyclin E表达的阳性率则分别为20.0%、7.0%、26.5%和31.6%, 在寒热夹杂型与脾胃虚寒型中表达的, 有显著性差异(P<0.05). TGF-α和Cyclin E表达均在脾胃虚寒型最低. TGF-α和Cyclin E表达存在显著的正相关关系.

结论: 在中医不同证型患者中, TGF-α和Cyclin E在胃病变组织中的表达存在差异, TGF-α和Cyclin E的表达存在正相关关系.

关键词: 慢性胃疾病; 中医证型; 转化生长因子α; Cyclin E

Expression of transforming growth factor α and Cyclin E and their correlation in chronic gastric lesion tissues from patients with different TCM types

Wei-Jiang Liang, Ye-Jun Ma, Xi Yan, Wan-Dai Zhang, Rong-Cheng Luo

Wei-Jiang Liang, Rong-Cheng Luo, Cancer Center, Nanfang Hospital, Southern Medical University, Guangzhou 510515, Guangdong Province, China

Ye-Jun Ma, Xi Yan, Wan-Dai Zhang, Department of Digestive Diseases, Nanfang Hospital, Southern Medical University, Guangzhou 510515, Guangdong Province, China

Correspondence to: Wan-Dai Zhang, Department of Digestive Disease, Nanfang Hospital, Southern Medical University, 1838 Guangzhou Road, Guangzhou 510515, Guangdong Province, China. zhangwdcn@163.com

Received: March 8, 2008
Revised: April 7, 2008
Accepted: April 21, 2008
Published online: April 28, 2008

Abstract

AIM: To explore the expression of transforming growth factor α (TGF-α) and Cyclin E in chronic gastric lesion tissues from patients with different types of traditional Chinese medicine (TCM), and analyze the correlation between TGF-α and Cyclin E expression.

METHODS: The patients (n = 135) with chronic gastric diseases were classified to 4 groups according to different TCM types such as disharmony between liver and stomach (group A), spleen-stomach cold deficiency (group B), stomach-yin deficiency (group C), and mixed cold and heat (group D). Immunohistochemical staining was used to examine the expression of TGF-α and Cyclin E in the lesion tissues and the correlation between TGF-α and Cyclin E expression was also ssessed.

RESULTS: The positive rates of TGF-α expression in the lesion tissues of group A, B, C and D were 25.0%, 18.6%, 47.1% and 42.1%, respectively, and there was significant difference between group B and C (P < 0.05). The positive rates of Cyclin E expression were 20.0%, 7.0%, 26.5% and 31.6%, respectively, and there was marked difference between group B and D (P < 0.05). Both TGF-α and Cyclin E expression were the lowest in group B, and there existed a positive correlation between the expression of TGF-α and Cyclin E.

CONCLUSION: TGF-α and Cyclin E are differentially expressed in chronic gastric lesion tissues of patients with different TCM types, and the expression of TGF-α and Cyclin E are positively correlated.

Key Words: Chronic gastric diseases; Trational Chinese medicine type; TGF-α; Cyclin E

0 引言

在慢性胃疾病的发病过程中, 几乎都出现不同的中医证型. 探索其中医证型的现代医学基础, 是提高中西医结合辨证施治疗效的重要途径之一. 研究认为, 中医分型与慢性胃疾病的病理生理改变有一定关系[1]. 转化生长因子α(transforming growth factor alpha, TGF-α)是重要的胃肠道生长因子之一, 与胃肠道慢性疾病关系密切[2]. 在炎症、损伤修复中其促上皮组织增生, 使细胞发生转化, 但有潜在的致癌危险. 已发现其在胃癌前病变及胃癌中有较高表达, 可促进胃癌的发生发展. Cyclin E是重要的细胞周期调节蛋白, 在细胞由G1向S期进程中起主要作用, 其促进细胞增殖. 已发现某些肿瘤Cyclin E基因扩增或蛋白高表达, 对肿瘤的发生发展起着促进作用[3]. 本研究旨在探讨中医证型与促进细胞增殖的TGF-α和Cyclin E表达之间的关系.

1 材料和方法

1.1 材料

南方医院就诊的慢性胃病患者135例, 男87例, 女48例. 年龄16-72岁, 中位年龄46岁, 其中慢性浅表性胃炎61例, 肠上皮化生25例, 不典型增生18例, 胃溃疡8例、胃癌23例. 标本为胃镜活检组织, 每例取3-5块病变组织, 经40 g/L甲醛固定、石蜡包埋、3 mm连续切片, 进行HE染色及病理学检查, 并确定所选组织与诊断无误, 然后进行TGF-α和Cyclin E的免疫组化染色.

1.2 方法

1.2.1 中医分型: 根据临床症状按以下标准把患者分为四型[1]: (1)肝胃不和型主症: 胃脘胀痛, 窜及两肋, 嗳气、泛酸、纳差、善叹气; 舌淡红, 苔薄白或薄黄; 脉弦或沉弦. (2)脾胃虚寒型, 主症: 胃脘隐痛, 喜暖喜按, 空腹痛重, 得食痛减, 吐清水, 神倦, 便溏; 舌胖、有齿印, 苔薄白; 脉细或虚软无力. 胃口差, 食后腹胀, 口燥唇干, 消瘦乏力; 副症: 五心烦热, 大便干结, 舌红少苔, 脉细数. (3)胃阴不足型, 主症: 胃脘隐痛或灼痛, 口干舌燥, 喜冷饮, 失眠多梦, 大便干结; 舌红干, 少苔、无苔或剥脱苔; 脉细数. (4)寒热夹杂型, 主症: 胃脘隐痛或胀痛, 喜暖喜按, 嗳气泛酸, 口干失眠, 大便干结或时干时稀; 舌红胖有齿印, 苔白黄相间或黄腻; 脉弦细数或滑数.

1.2.2 免疫组化染色: 组织切片经二甲苯、梯度酒精脱蜡至水后, 浸入3 g/L H₂O₂内15 min, 以阻断内源性过氧化酶活性; 对TGF-α抗原进行微波15 min修复; 山羊血清封闭10 min; 加一抗TGF-α(mAb, 武汉博士德生物工程公司, 1:50)或Cyclin E(pAb, Santa Cruz公司, 1:50), 37℃水浴孵育3 h, PBS漂洗5 min×3次; 37℃下分别与二抗(羊抗兔或羊抗鼠IgG, 1:100)反应20 min, PBS漂洗; 加三抗(辣根过氧化物酶标记的链卵白素, 1:100)37℃反应20 min, PBS漂洗5 min×3次; DAB显色2 min; 苏木素复染、脱水、透明、封片. 阴性对照的一抗用PBS代替, 阳性对照用已知阳性片进行染色.

1.2.3 结果评价: 染色结果分级参照Shimizu et al[4]评分方法. 每张切片均观察整体染色情况, 选择5个有代表性的区域, 每区计算200个细胞. 阳性细胞数计分: 阳性数≤5%: 0; 阳性数>5%但≤35%: 1; 阳性数>35%但≤70%: 2; 阳性数>70%: 3. 阳性强度记分: 不着色: 0; 弱着色: 1; 强着色: 2; 阳性分级: 以上两项相加, 0: (-); 2: (±); (-)-(±): 阴性; 3以上: (+), 阳性.

统计学处理 用SPSS10.0统计软件进行χ²检验, P<0.05有显著性差异.

2 结果

TGF-α和Cyclin E在细胞内表达部位不同. TGF-α主要表达于胞质, Cyclin E主要表达于胞核. 两者在中医不同证型的胃病变组织的表达存在差异(表1). TGF-α的阳性率在胃阴不足型最高, 在寒热夹杂型次之; 在胃阴不足型与脾胃虚寒型之间的比较, 有显著性差异(P<0.05). Cyclin E的表达则在寒热夹杂型最高, 胃阴不足型次之; 在寒热夹杂型与脾胃虚寒型之间的比较, 有显著性差异(P<0.05). 两者均在脾胃虚寒型表达最低. 在观察中发现, 同一标本如果TGF-α阳性, Cyclin E也常会阳性(表2). 经统计学分析, TGF-α和Cyclin E表达存在显著的正相关(P<0.05).

表1 慢性胃病、胃癌组织TGF-α和Cyclin E表达与中医证型的关系.

中医分型	n	TGF-α			Cyclin E
		＋	-	阳性%	＋	-	阳性%
肝胃不和型	20	5	15	25.0	4	16	20.0
脾胃虚寒型	43	8	35	18.6	3	40	7.0
胃阴不足型	34	16	18	47.1a	9	25	26.5
寒热夹杂型	38	16	22	42.1	12	26	31.6a

^aP<0.05 vs 脾胃虚寒型.

表2 慢性胃病、胃癌组织TGF-α和Cyclin E表达的相关性.

TGF-α	Cyclin E		合计
	+	-
＋	25	13	38
-	4	93	97
合计	29	106	135

P<0.05.

3 讨论

采用现代医学科学技术进行研究, 已发现中医证型不仅与患者机能状态有关, 而且与组织病变程度存在一定关系[1-5]. 研究还发现, TGF-α和Cyclin E可促进细胞增殖并与肿瘤的发生发展密切相关. TGF-α对胃肠黏膜等细胞的增殖和分化, 以及许多组织器官的发生发展有促进作用[6-7]; 但在肿瘤中常有较高表达, 可促进肿瘤自身增殖[8-12]. Cyclin E在促进细胞周期进程中起重要作用[13]; 在肿瘤组织中常高表达, 是候选的癌基因[14-18].

本研究探讨慢性胃黏膜病变和胃癌患者的中医证型与具有促癌作用的TGF-α和Cyclin E表达的关系. 结果发现不同中医证型的胃黏膜病变组织中, TGF-α和Cyclin E的表达存在差异, TGF-α的阳性率在胃阴不足型最高, 在寒热夹杂型次之; Cyclin E则在寒热夹杂型最高, 胃阴不足型次之; 两者表达均在脾胃虚寒型的最低.

从组织病理学角度出发, 胃黏膜肠上皮化生、不典型增生和胃溃疡是癌前病变. 本研究结果提示, 胃癌前病变患者如属于胃阴不足和寒热夹杂型, 可能有较高的癌变危险. 胃癌患者如属于这两种证型, 可能有更高的恶性程度. 这提醒我们, 在临床工作中对这些患者应有更高的重视程度, 应采取更积极的治疗措施.

评论

背景资料

在疾病的发生发展中, 患者常表现为不同的中医证型. 探讨中医证型与机体病理生理改变的关系, 是提高中西医结合辨证施治疗效的重要途径之一.

同行评议者

黄颖秋, 教授, 本溪钢铁(集团)有限责任公司总医院消化内科; 王学美, 研究员, 北京大学第一医院中西医结合研究室.

研发前沿

研究中医证型与病变组织的分子病理变化的关系, 是中医的现代医学基础研究热点之一.

应用要点

本文探讨中医证型与胃病变组织中促癌分子TGF-α和Cyclin E的关系, 为指导临床治疗提供依据.

同行评价

本文选题较新颖, 研究方法较科学, 结论明确, 对临床工作有一定的参考价值.

备注

编辑:李军亮 电编:何基才

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