进展期胃癌HSP90α、CD44v6表达与其临床生物学行为关系的研究

摘要

目的: 探讨HSP90α、CD44v6在进展期胃癌中的表达特点及其生物学行为, 为进展期胃癌的临床治疗提供理论依据.

方法: 对93例进展期胃癌及其56例淋巴结转移癌中HSP90α、CD44v6的表达, 应用免疫组化方法进行检测.

结果: HSP90α在胃癌及淋巴结转移癌中的阳性率分别为54.84%(51/93)、66.07%(37/56). HSP90α在胃癌中表达分别与癌细胞浸润深度、淋巴结转移及TNM分期有关(P<0.05); CD44v6在胃癌及淋巴结转移癌中的阳性率分别为50.54%(47/93)、73.21%(41/56), 二者之间的差异显著(P<0.01). CD44v6在胃癌中的表达分别与癌细胞分化程度、浸润深度、淋巴结转移及TNM分期有关(P<0.05).

结论: 进展期胃癌中HSP90α、CD44v6阳性表达与其临床生物学行为尤其是淋巴结转移密切相关, 患者可能预后较差, 应采取积极的综合治疗措施.

关键词: 无

N/A

N/A

Correspondence to: N/A

Received: September 23, 2004
Revised: October 11, 2004
Accepted: October 20, 2004
Published online: March 15, 2005

Abstract

N/A

Key Words: N/A

0 引言

胃癌是我国最常见的恶性肿瘤之一, 胃癌死亡率总的呈上升趋势[1]. 胃癌淋巴结转移是影响患者预后的主要因素[2-3], 探究胃癌转移的分子机制, 寻找与胃癌转移相关的生物学标志物是胃癌临床与基础研究的主题之一. 热休克蛋白(heat shock protein, HSP)是细胞在应激原特别是高温诱导下所生成的一组高度保守性蛋白质. 一般根据HSP同源程度以及分子量的大小可分为HSP110、HSP90、HSP70、HSP60、小分子HSP及泛素等几个家族. 一些学者报道[4-6], HSP70在一些肿瘤组织中表达增加. 但关于HSP90与肿瘤的关系特别是与胃癌的进展及转移关系的研究报道较少. 而CD44是近年备受关注的细胞表面黏附分子之一. CD44v6是一类具有高度异质性的单链膜表面糖蛋白, 能够介导淋巴细胞归巢, 可能与肿瘤的发生发展及侵袭有关. 已有关于CD44v6与食管癌[7]、肝癌[8]、结直肠癌[9]及胃癌[10-11]等的研究报道, 但是关于CD44v6在进展期胃癌中的研究少见报道.

为此, 我们应用灵敏的SP免疫组织化学方法对93例进展期胃癌及相应的56例淋巴结转移癌细胞的HSP90α、CD44v6基因蛋白的表达水平进行检测, 同时分析二者表达与胃癌临床生物学行为的关系, 特别是与胃癌区域淋巴结转移的关系, 探讨HSP90α、CD44v6在预测胃癌转移潜能中的客观生物学意义, 为临床胃癌手术时合理实施淋巴结廓清范围、预测胃癌转移及化疗等综合治疗提供依据.

1 材料和方法

1.1 材料

收集河北北方学院附属第一医院1998-01/2002-07间胃癌根治术标本93例. 其中男性59例; 女性34例. 年龄31-78岁, 平均年龄52.4岁.≥60岁37例, <60岁56例. 胃底部胃癌8例、胃体部胃癌13例、胃窦部胃癌72例. 肿瘤大小: 直径≥5 cm 55例, <5 cm 38例. Borrmann分型: 隆起型(B1)14例; 局限溃疡型(B2)27例; 浸润溃疡型(B3)32例; 弥漫浸润型(B4)20例.高分化腺癌41例, 中分化腺癌32例, 低分化腺癌20例. 浸润深度: 肌层(T2)37例, 浆膜层(T3)46例, 侵出浆膜层(T4)10例. 有淋巴结转移56例, 无淋巴结转移37例. TNM分期: II期35例, III期51例, IV期7例. 所有病例均无同时患其他恶性肿瘤. 患者手术前均未经放疗或化疗. HSP90α抗体为兔抗人HSP90α多克隆抗体, CD44v6抗体为鼠抗人CD44v6单克隆抗体, 均为美国Santa Cruz公司产品. SP免疫组织化学染色试剂盒为美国Zymed公司产品. 均购自北京中山生物技术有限公司.

1.2 方法

胃癌手术后常规切取癌组织, 同时对区域淋巴结进行取材. 标本经40 g/L中性甲醛溶液固定, 梯度酒精脱水、石蜡包埋, 每个检测蜡块进行连续切片6-8张, 厚度为5 μm. 每例取一张做HE染色常规病理组织检查, 用于病理学诊断及分类, 剩余行免疫组化染色. 对胃癌93例、淋巴结转移癌56例组织切片分别进行HSP90α、CD44v6免疫组织化学染色. 用医用微波炉进行抗原修复, 按说明书进行免疫组化染色, DAB显色, 苏木素复染, 常规脱水、透明及中性树胶封片. 每批实验均设有已知阳性切片对照及PBS替代Ⅰ抗的阴性对照. 阳性对照片充分显色后终止显色. 光镜下观察细胞浆或细胞膜被染成大小不等、深浅不一的棕黄色颗粒为阳性细胞. 其染色深浅与被检测抗原的含量多少有关. 癌组织间质不着色. HSP90α主要位于细胞浆, 少量位于细胞核. CD44v6主要位于细胞膜. 每张切片随机观察6-8个高倍视野, 阳性细胞数(取被观察视野的平均数)超过5%时即确定为染色阳性病例. 染色结果判定参照1996年全国免疫组织化学技术与诊断标准化专题研讨会意见, 将染色结果分为: 阴性(-), <5%的细胞着色; 弱阳性(+), 细胞质或膜内有5%-24%的细胞着色, 为浅黄色颗粒; 阳性(++), 25%-50%的细胞着色, 为黄色颗粒; 强阳性(+++), >50%的细胞着色, 为棕黄色颗粒.

统计学处理 各组实验资料应用SPSS10.0统计软件进行统计分析, HSP90α、CD44v6阳性率的比较采用χ²检验, 当P<0.05时认为差异具有显著性.

2 结果

2.1 胃癌组织中HSP90α的表达与临床生物学行为的关系

HSP90α在胃癌组织中表达的阳性率为54.84%(51/93). 由表1可见, HSP90α在胃癌组织中的阳性表达分别与患者性别、年龄、肿瘤部位、肿瘤大小、分化程度及Borrmann分型无显著相关(P>0.05); 而分别与癌的浸润深度、淋巴结转移及TNM分期有关(P<0.05). 随着浸润深度的增加, HSP90α表达阳性率增高; HSP90α在有淋巴结转移组表达的阳性率显著高于无淋巴结转移组; 并且随TNM分期的增高, HSP90α表达也明显增加.

表1 胃癌中HSP90α表达及其与临床生物学行为的关系.

临床病理参数	分组	N	阳性例数(%)	P值
	总计	93	51(54.84)
性别	男	59	32(54.24)	0.878
	女	34	19(55.88)
年龄	≥60	37	21(56.76)	0.763
	<60	56	30(53.57)
部位	底部	8	5(62.50)	0.760
	体部	13	8(61.54)
	窦部	72	38(52.78)
肿瘤大小	<5 cm	38	20(52.63)	0.722
	≥5 cm	55	31(56.36)
Borrmann
分型	B1	14	6(42.86)	0.781
	B2	27	15(55.56)
	B3	32	19(59.38)
	B4	20	11(55.00)
分化程度	高分化	41	19(46.34)	0.215
	中分化	32	18(56.25)
	低分化	20	14(70.00)
浸润
深度	T2	37	14(37.84)	0.027
	T3	46	30(65.22)
	T4	10	7(70.00)
淋巴结
转移	无	37	13(35.14)	0.002
	有	56	38(67.86)
TNM分期	II	35	13(37.14)	0.026
	III	51	34(66.67)
	IV	7	4(57.14)

2.2 胃癌组织中CD44v6的表达与临床生物学行为的关系

CD44v6在胃癌组织中表达的阳性率为50.54%(47/93). 由表2可见, CD44v6在胃癌组织中的表达分别与患者性别、年龄、发病部位、肿瘤大小及Borrmann分型均无显著相关(P>0.05); 而分别与癌的分化程度、浸润深度、淋巴结转移及TNM分期具有显著相关性(P<0.05). CD44v6表达在无淋巴结转移组的阳性率仅为35.14%(13/37), 而在有淋巴结转移组的阳性率为60.71%(34/56), 两组之间的差异具有显著性(P<0.05).

表2 胃癌中CD44v6表达及其与临床生物学行为的关系.

临床病理因素	分组	n	阳性例数(%)	P值
	总计	93	47(50.54)
性别	男	59	30(50.85)	0.937
	女	34	17(50.00)
年龄	≥60	37	17(45.95)	0.472
	<60	56	30(53.57)
部位	底部	8	3(37.50)	0.733
	体部	13	7(53.85)
	窦部	72	37(51.39)
肿瘤大小	<5 cm	34	18(52.94)	0.849
	≥5 cm	57	29(50.88)
Borrmann分型	B1	14	8(57.14)	0.817
	B2	27	15(55.56)
	B3	32	15(46.88)
	B4	20	9(45.00)
分化程度	高分化	41	15(36.59)	0.018
	中分化	32	17(53.13)
	低分化	20	15(75.00)
浸润深度	T2	37	14(37.84)	0.047
	T3	46	25(54.35)
	T4	10	8(80.00)
淋巴结转移	无	37	13(35.14)	0.016
	有	56	34(60.71)
TNM分期	II	35	13(37.14)	0.041
	III	51	28(54.90)
	IV	7	6(85.71)

2.3 HSP90α、CD44v6在胃癌原发癌及淋巴结转移癌中的表达

对于有淋巴结转移的56例淋巴结转移癌分别进行HSP90α及CD44v6表达的检测与分析. HSP90α在原发癌组织中表达的阳性率为54.84%(51/93), 而在淋巴结转移癌中的阳性率为66.07%(37/56), 阳性率呈增高趋势, 但二者之间的差异不够显著(P = 0.177). CD44v6在原发癌组织中表达的阳性率为50.54%(47/93), 淋巴结转移癌中的阳性率为73.21%(41/56), 阳性率也逐渐增高, 二者之间的差异显著(P = 0.006).

3 讨论

肿瘤的浸润和转移是恶性肿瘤的两大生物学行为, 亦是恶性肿瘤患者疗效差、预后不良及死亡的主要原因. 多年来, 胃癌一直是我国发生率和死亡率最高的恶性肿瘤之一. 近20 a来, 5 a生存率一直徘徊在20%-45%之间[12]. 由于临床上尚无准确可靠的预测方法, 故而使浸润和转移的早期诊断和有效预防显得力不从心.

人HSP90以是否含有丰富的谷氨酰胺片段而分为HSP90α和HSPβ两类. 正常胃黏膜组织中分布少量的HSP90α[13]. 当胃黏膜发生炎症病变时, HSP90α水平增高. HSP90α在胃癌的表达明显高于胃炎中的表达, 同时也高于癌旁组织. 本研究应用免疫组化方法, 对HSP90α在胃癌及淋巴结转移的癌细胞中的表达进行了研究. HSP90α在胃癌组织中表达的阳性率为54.84%(51/93), 提示其可能参与了胃癌细胞的形成及浸润进展. HSP90α可通过调节细胞周期而促进细胞增生[14-15]. 本研究中发现, 虽然HSP90α表达与癌细胞分化程度无显著相关性, 但是随癌细胞浸润深度的增加, 其表达阳性率显著增高, 且与淋巴结转移及临床TNM分期密切相关. HSP90α表达阳性率在有淋巴结转移组高达67.86%, 而在无淋巴结转移组的阳性率仅为35.14%. 提示HSP90α表达增高可能促进了癌细胞的生长及浸润进展. 目前, 只有Zuo et al[16]进行了相关报道. 进一步研究发现, HSP90α在淋巴结转移癌组织中表达的阳性率为66.07%(37/56), 与胃癌中的阳性率相比明显增高, 提示HSP90α可能促进了胃癌细胞的转移. 目前, 对于HSPs家族在胃癌中的表达及其作用报道不一[17-18].

恶性肿瘤的转移扩散须借助于细胞与细胞外间质等的一系列相互作用, 其中黏附分子与肿瘤细胞的侵袭转移行为密切相关. CD44是近年备受关注的细胞表面黏附分子之一. 含不同变异体外显子编码序列的CD44称为CD44拼接变异体, 即CD44v[19]. 本研究中, CD44v6在胃癌组织中的阳性率为50.54%(47/93), 而在淋巴结转移癌中的阳性率为73.21%(41/56), CD44v6表达阳性率显著提高; 同时CD44v6表达阳性率在有淋巴结转移组(60.71%)明显高于无淋巴结转移组(35.14%), 提示CD44v6表达可能促进了胃癌细胞的转移. 体外实验证实CD44v6的表达是非转移性大鼠胰腺癌细胞株获得转移潜能所必需的[20]. 胃癌细胞中CD44v6的过度表达可能使胃癌细胞产生浸润表型, 癌细胞象淋巴细胞归巢一样向淋巴结转移, 模拟循环淋巴细胞的行为, 利于癌细胞播散转移.

正常胃黏膜一般不表达CD44v6. 本研究中CD44v6在胃癌中有较高表达, 其表达阳性率随癌细胞分化程度的降低而有所增高, 而随浸润深度的增加及TNM分期的增高而明显增高, 提示CD44v6表达可使胃癌细胞具有较强的侵袭、转移能力等较恶的生物学行为以及病情较晚、预后较差的特点. Washington et al[21]亦报道CD44v6表达与胃癌浸润转移显着相关.

胃癌组织中HSP90α、CD44v6基因蛋白的表达异常在进展期胃癌的浸润进展及侵袭转移中发挥着重要作用. 目前, 对胃癌组织及区域淋巴结中HSP90α及CD44v6的表达进行联合检测尚未见报道. 在本研究中淋巴结转移率(60.22%, 56/93)较高. 因此, 有可能应用免疫组化等方法, 对胃癌组织中HSP90α和/或CD44v6的表达进行单一或联合检测, 将有助于对进展期胃癌患者淋巴结转移潜能和患者预后的判断, 对HSP90α和/或CD44v6阳性表达的进展期胃癌患者应采取更为积极有效的综合治疗措施.

备注

编辑: 张海宁

表 1 胃癌中HSP90a表达及其与临床生物学行为的关系

表 2 胃癌中CD44v6表达及其与临床生物学行为的关系

参考文献

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