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世界华人消化杂志. 2005-03-01; 13(5): 685-687
在线出版日期: 2005-03-01. doi: 10.11569/wcjd.v13.i5.685
H. pylori iceA基因与慢性胃炎、消化性溃疡、胃癌的关系
张彩凤, 林志辉, 吴芳, 陈明红, 王辛, 付丹, 潘秀珍, 彭孝纬
张彩凤, 林志辉, 吴芳, 陈明红, 王辛, 付丹, 潘秀珍, 彭孝纬, 福建医科大学福建省立临床医院消化内科 福建省福州市 350001
基金项目: 福建省卫生厅科研基金项目, No. 200022.
通讯作者: 林志辉, 350001, 福建省福州市东街134号, 福建医科大学福建省立临床医院消化内科.
电话: 0591-87699780
收稿日期: 2004-11-12
修回日期: 2004-11-25
接受日期: 2004-11-29
在线出版日期: 2005-03-01

目的: 研究幽门螺杆菌(H. pylori)的iceA基因与慢性胃炎、消化性溃疡和胃癌的关系.

方法: 从胃十二指肠疾病的患者胃镜活检标本中分离培养H. pylori, PCR扩增检测H. pylori的iceA基因共138例, 其中慢性浅表性胃炎47例、慢性萎缩性胃炎22例、消化性溃疡49例和胃癌20例.

结果: 138例中iceA1基因、iceA2基因总的阳性率分别为47.1%和47.8%, 其中36例(26.1%)为iceA1和iceA2均阳性, 43例(31.2%)为iceA1和iceA2均阴性. iceA1在慢性浅表性胃炎、慢性萎缩性胃炎、消化性溃疡及胃癌患者H. pylori中的阳性率分别为44.7%、40.1%、59.2%、30.0%, iceA2基因的阳性率分别为53.2%、31.8%、65.3%、10.0%, iceA1和iceA2在消化性溃疡中的检出率明显高于其他疾病组.

结论: H. pylori的iceA1和iceA2基因与消化性溃疡的发病相关.

关键词: 无
引文著录: 张彩凤, 林志辉, 吴芳, 陈明红, 王辛, 付丹, 潘秀珍, 彭孝纬. H. pylori iceA基因与慢性胃炎、消化性溃疡、胃癌的关系. 世界华人消化杂志 2005; 13(5): 685-687
N/A
N/A
Correspondence to: N/A
Received: November 12, 2004
Revised: November 25, 2004
Accepted: November 29, 2004
Published online: March 1, 2005

N/A

Key Words: N/A
0 引言

iceA基因是H. pylori与胃黏膜细胞接触后诱导表达的基因, 包括iceA1、iceA2两个等位基因, 分别存在于不同的H. pylori菌株中, 被认为可能是H. pylori的又一致病因子. iceA基因能不能作为H. pylori致病性和毒力的流行病学标志, 其等位基因的类型及意义有待于进一步研究确定. 我们分析福建地区临床分离的H. pylori菌株的iceA基因类型, 探讨其与胃十二指肠疾病关系.

1 材料和方法
1.1 材料

分离的H. pylori菌株来自2003-2004年在我院接受内镜检查的138例患者, 其中慢性浅表性胃炎47例, 慢性萎缩性胃炎22例, 消化性溃疡49例和胃癌20例. 疾病的诊断依据胃镜和病理学检查.

1.2 方法

胃窦黏膜活检标本接种于选择性琼脂培养基上(含75 mL/L羊血及抗生素), 于37℃微需氧环境中培养3-5 d, 分离菌落, 经菌落形态、涂片染色以及生化反应(尿素酶、过氧化氢酶、氧化酶)证实, 冻存于-70℃备用. 用一次性DNA抽提试剂盒提取冻存H. pylori菌株的基因组DNA, 保存于-70℃备用. iceA基因PCR引物设计由博亚生物有限公司合成(表1). PCR反应总体积为25 μL. iceA的反应条件为10×反应缓冲液2.5 μL, dNTP0.5 μL, 引物1引物2各0.5 μL, TaqE1U, 模板DNA4 μL. iceA的扩增条件为94℃ 40 s, 54℃ 40 s, 72℃ 1 min, 共35个循环. PCR扩增产物经20 g/l的琼脂糖凝胶电泳, 电脑图像分析仪观察、分析和摄像记录结果.

表1 iceA基因PCR引物.
目的基因引物序列产物的大小
iceA1F5'GTGTTTTTAACCAAAGTATC3'246 bp
iceA1R5'CTATAGCCAGTCTCTTTGCA3'
iceA2F5'GTTGGGTATATCACAATTTAT3'
iceA2R5'TTGCCCTATTTTCTAGTAGGT3'229 bp 334bp

统计学处理 采用χ2检验和Fisher精确检验, P<0.05为差异有显著性.

2 结果

在138株H. pylori临床菌株中, iceA1和 iceA2的总检出率分别为47.1%和47.8%, 其中36例(26.1%)为iceA1和 iceA2均阳性, 43例(31.2%)为iceA1和 iceA2均阴性. 图1为iceA1和 iceA2基因片段扩增结果. iceA1和iceA2基因消化性溃疡组(59.2%, 65.3%)的检出率显著高于慢性胃炎(43.5%, 46.4%)和胃癌(30%, 10%)组(P<0.05), 其他疾病组之间的iceA1和 iceA2的检出率无显著性差异(P>0.05). iceA1基因和iceA2基因同时阳性的菌株有36例, 其中慢性浅表性胃炎有12(33.3%)例, 慢性萎缩性胃炎有4例(11.1%), 消化性溃疡有20例(55.6%), 没有发现胃癌患者中有混合感染. iceA2基因表现为229 bp和334 bp的片段, 部分菌株可同时具有229 bp和334 bp的基因片段. iceA2的基因片段扩增结果在不同疾病的检出率有差别(表2).

图1
图1 基因片段的扩增结果. A: iceA1: 1为100 bp标志, 2-8iceA1扩增片段; B: iceA2: 1为100 bp标志, 2、8为同时有229 bp和334 bp, 3为iceA2阴性, 4为229 bp, 5-7为334 bp.
表2 iceA2基因片段在不同疾病中的检出n(%).
诊断229 bp334 bp229 bp+334 bp合计
慢性浅表性胃炎9(36.0)7(28.0)9(36.0)25(37.9)
慢性萎缩性胃炎2(28.0)4(57.1)1(14.3)7(10.6)
消化性溃疡7(21.9)13(40.6)12(37.5)32(48.5)
胃癌1(50.0)1(50.0)0(0.0)2(3.0)
3 讨论

iceA基因是H. pylori与胃黏膜细胞接触后诱导表达的基因, 包括iceA1、iceA2两个等位基因, 分别存在于不同的H. pylori菌株中. 其中iceA2基因变异较大, 可表现为229 bp、334 bp、549 bp不同长度基因片段. iceA1被认为与十二指肠球部溃疡的发生密切相关, 而具有iceA2的H. pylori菌株与慢性胃炎的发生相关, 也有学者认为iceA2基因与消化性溃疡相关, 因此被认为是H. pylori的又一致病基因[4-9]. iceA1与编码乳糖奈瑟菌的核酸内切酶基因nlaⅢR同源, 但在蛋白水平的同源性仅有52%, iceA2基因的变异较大, 基因库中尚未见其有同源序列的存在[11-15]. 由于文献所报告的结果差异较大, iceA基因能不能作为H. pylori致病性和毒力的流行病学标志, 其等位基因类型的相关研究的意义有待于进一步研究确定. 不同国家的学者报告的iceA1、iceA2检出率及其与消化系统疾病的关系也不尽相同. 在巴西[1]iceA2型H. pylori菌株的检出率为90.1%, 与消化性溃疡关系密切. Van Doom et al[2]报道iceA1基因的检出率为56.4%, iceA2基因的检出率为26.6%, iceA1基因和iceA2基因都为阳性的检出率为14.9%, 提示部分患者可能存在iceA1和iceA2阳性的混合感染情况. iceA1基因和消化性溃疡相关. iceA1、iceA2何者与消化性溃疡有关, 或二者都有关, 有待进一步研究. 国内iceA 基因的研究较少, 有限的文献认为iceA基因与消化系统疾病没有关系[3].

迄今为止, 关于H. pylori iceA基因与胃十二指肠疾病关系有大量截然相反的研究报道, 这些相反结果可能与下列因素有关: (1)不同地区的H. pylori菌株的iceA基因表达与否及表达类型不同; (2) iceA基因可能和H. pylori菌株的其他基因存在协同作用. 或存在更重要的毒力基因; (3)H. pylori感染个体的宿主因素、环境因素等相互作用的相互作用的结果. 本结果显示在福建地区人群中, iceA1基因总的阳性率为47.1%, iceA2基因总的阳性率为47.8%. 慢性浅表性胃炎、慢性萎缩性胃炎、消化性溃疡和胃癌患者中分离的H. pylori菌株中, 消化性溃疡患者感染的H. pylori菌株iceA1基因和iceA2基因的阳性率均明显高于其他组. 对iceA2基因进行扩增时, 只出现了229 bp和334 bp, 而没有发现文献中所报道的549 bp片段[2], 日本分离的H. pylori也不具有549 bp的iceA2基因片段[4]. 我们发现有26.1%患者同时存在iceA1+和iceA2+菌株混合性感染[10], 高于多数文献报道情况[2]. 其原因除地域差异外, 尚需进一步研究分析. 我们认为iceA 基因(包括iceA1, iceA2)在消化性溃疡的发病中起着重要作用, iceA 1, iceA 2阳性的H. pylori菌株感染者将更有可能发生消化性溃疡. iceA 1, iceA 2阳性的H. pylori菌株可以在同一患者中出现, 因此在H. pylori的防治中也应重视混合感染的存在.

编辑: 张海宁 电编: 潘伯荣

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