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世界华人消化杂志. 2005-02-15; 13(4): 580-581
在线出版日期: 2005-02-15. doi: 10.11569/wcjd.v13.i4.580
干扰素a/b受体慢性乙型肝炎肝组织的免疫组化定位
樊和斌, 郭亚兵, 吴爱华, 朱幼芙, 蒋永芳, 侯金林
樊和斌, 郭亚兵, 吴爱华, 朱幼芙, 蒋永芳, 侯金林, 广州南方医院感染内科 广州省广州市 510515
通讯作者: 樊和斌, 510515, 广州省广州市, 广州南方医院感染内科
收稿日期: 2004-07-28
修回日期: 2004-08-27
接受日期: 2004-09-19
在线出版日期: 2005-02-15

目的: IFNa/bR在慢性乙型肝炎患者肝脏组织内的免疫组化定位及其对干扰素应答的预测作用.

方法: 应用链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶连接法, 对40例慢性乙型肝炎患者肝脏组织内IFNa/bR的分布特点进行了观察.

结果: IFNa/bR在慢性乙型肝炎患者肝脏组织肝细胞膜和胞质内均有不同程度的表达, 其中2例患者血管内也有分布.

结论: 慢性乙型肝炎患者肝肝组织内非溶性的IFNa/bR的表达量可能系IFNa干扰素应答率更为有效的预测指标.

关键词: N/A
引文著录: 樊和斌, 郭亚兵, 吴爱华, 朱幼芙, 蒋永芳, 侯金林. 干扰素a/b受体慢性乙型肝炎肝组织的免疫组化定位. 世界华人消化杂志 2005; 13(4): 580-581
N/A
N/A
Correspondence to: N/A
Received: July 28, 2004
Revised: August 27, 2004
Accepted: September 19, 2004
Published online: February 15, 2005

N/A

Key Words: N/A
0 引言

IFNa是一种重要的抗病毒药物, 他的作用机制之一是与细胞表面干扰素IFNa/bR结合, 通过JAK-STAT信号转导途径产生多种抗病毒蛋白. 由于受体的表达具有异质性, 因此临床上表现为对干扰素疗效不同. 以前研究显示慢性肝炎患者肝脏组织内IFNa/bR的表达量可以预测IFNa的疗效[1], 我们探讨慢性乙型肝炎患者肝脏组织内IFNa/bR的免疫组化定位及其临床意义.

1 材料和方法
1.1 材料

肝脏组织40例来自本院的慢性乙型肝炎患者(诊断标准符合2000年第10次全国传染病与寄生虫病学会联合修定的病毒性肝炎防治方案[1], 并经肝脏病理证实), 行肝脏穿刺取的组织, 去除表面血迹, 经40 g/L中性甲醛固定, 石蜡包埋, 3 mm厚切片.

1.2 方法

采用链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连接法按试剂盒的说明操作: 石蜡切片脱蜡至水, 用过氧化物酶封闭试剂封闭内源性过氧化物酶 5 min; 在枸橼酸钠盐缓冲液中进行微波炉抗原热修复3 min; 磷酸盐缓冲液(PBS)连续洗3次, 每次5 min; 将切片标本置于湿盒内加10 mL/L正常兔血清, 室温下放置15 min; 弃去多余血清, 加入抗生物素蛋白封闭试剂, 室温下放置15 min.PBS洗后小心的擦掉多余PBS加入生造物素蛋白封闭试剂室温下孵育15 min.PBS漂洗后加入分别滴加一抗1:1000(兔抗人alpha/beta chain 2受体多克隆抗体, 为美国R&D公司产品), 4 ℃冰箱过夜; PBS连续洗3次, 每次5 min; 滴加二抗(生物素标记羊抗兔, 美国R&D公司产品), 37 ℃水浴60 min; PBS连续洗3次, 每次5 min; 滴加酶标底物(辣根酶标记链霉菌亲和素, 美国R&D公司产品), 37 ℃水浴30 min; PBS连续洗3次, 每次2 min; DAB显色, 苏木素复染, 逐级乙醇脱水, 二甲苯透明, 树胶封片. 阴性对照采用PBS代替一抗. 用低倍和高倍镜观察切片, 阳性细胞为镜下组织细胞结构清晰, 细胞质内有棕黄色颗粒沉着, 染色明显高于背景.

2 结果

患者肝细胞质及细胞膜均有不同程度IFNa/bR的表达(图1A-C), 其中仅有两例患者血管内有表达(图1D).

图1
图1 慢性乙型肝炎肝组织的表达, SP400. A: 胞质、胞膜强阳性; B: 胞质、胞膜阳性; C: 胞质、胞膜弱阳性; D: 血管内.
3 讨论

人的干扰素受体(hINFR)分为两型, a, b共用I型受体(IFNa/bR), IFNg为II型受体, 其中IFNa/bR有两个已知的亚单位[2-3].Lutfalla et al报道IFNa/bR-2有三种不同的形式: 可溶性IFNR-2a, 短IFNR-2b及长IFNR-2c, 并证实是同一基因不同剪接方式的产物[4].IFNR-2b与IFNR-2c在胞外及跨膜区相同, 胞内除开始15个氨基酸后就完全不同.

随着干扰素作用机制的阐明, 干扰素已成为目前慢性病毒性肝炎治疗的主要药物, 但其严重的副作用及较低的持续应答率限制了进一步的广泛应用, IFNa/bR对干扰素应答的预测作用的研究也逐步开展. Morita et al发现慢性丙型肝炎患者肝组织内干扰素受体的表达量(mRNA)与干扰素的持续应答率有关[5].Fujiwara et al比较免疫组化和竟争性聚合酶链反应测量I型干扰素受体在肝组织内表达量与干扰素的应答的关系, 发现受体的蛋白质水平比RNA水平更有意义[6]. 结合本实验的研究结果, 我们认为慢性肝炎患者肝组织内有非溶性的(胞膜及胞质), 又有可溶性的(血浆内)IFNa/bR表达, 而可溶性的是抑制干扰素抗病毒活性, 因此非溶性IFNa/bR可能系预测干扰素疗效更为有效的指标. 此外我们还发现, IFNa/bR在40例慢性乙型肝炎患者肝组织的肝细胞质及胞膜均有不同程度的表达, 而仅有2例患者血管内发现有表达, 可能与标本的处理过程中丢失有关. Pekki et al用一种新的冷冻与蒸气固定方法可以提高可溶性蛋白免疫组化的检出率.

编辑:张海宁

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