PCNA和VEGF在肝细胞肝癌中的表达意义

摘要

目的: 探讨PCNA基因蛋白和VEGF在肝细胞肝癌发生和发展中的作用.

方法: 应用免疫组化S-P法检测了PCNA基因蛋白和VEGF在100例肝细胞肝癌中的表达情况, 并分析了其与肝细胞肝癌临床病理指标的关系.

结果: PCNA基因蛋白和VEGF在肝细胞肝癌中的表达明显高于正常肝组织, 差异显著(91.0% vs 14.3% 及81.0% vs 23.8%, P<0.05).PCNA基因蛋白和VEGF在肝细胞肝癌中的表达与组织分化程度、年龄等临床病理指标无明显相关性; 而VFGF与静脉内小癌栓形成有相关性(r = 11.05 , P<0.05).

结论: PCNA和VEGF对肝细胞肝癌的诊断、治疗和预后判断有积极意义.

关键词: N/A

N/A

N/A

Correspondence to: N/A

Received: November 1, 2004
Revised: November 12, 2004
Accepted: November 17, 2004
Published online: February 15, 2005

Abstract

N/A

Key Words: N/A

0 引言

增生细胞核抗原(PCNA)基因的表达及血管内皮生长因子(VEGF)与多种肿瘤的恶性程度、浸润、转移密切相关[1-2]. 为了探讨PCNA和VEGF在肝细胞肝癌中的表达情况及其与恶性行为之间的关系, 我们应用免疫组化S-P方法检测了100例肝细胞肝癌以及手术中切除的部分非肿瘤肝组织中PCNA基因蛋白的表达情况和VEGF的表达情况. 目的在于进一步探明其在肝细胞肝癌发生、发展中的作用, 为肝细胞肿癌的诊断, 治疗以及预后判断提供依据.

1 材料和方法

1.1 材料

1994/2001年手术切除肝细胞肝癌标本100例; 非肿瘤肝标本100例, 为肝细胞肝癌癌肿切除时距肿瘤边缘0.4 cm以上, 病理证实无肝细胞肝癌累及的组织, 其中79例为结节性肝硬化, 21例为正常肝组织. 肝细胞肝癌中高分化36例, 中分化44例, 低分化20例. 静脉内有微小癌栓54例. 年龄37-78岁(平均60岁).50岁以下37例; 50岁以上63例. 标本以40 g/L甲醛液固定, 常规石蜡包埋存档. PCNA和VEGF单克隆抗体和SP试剂盒购自福迈新生物技术公司.

1.2 方法

石蜡4 mm连续切片. 每例用TBS代替第一抗体作阴性对照, 用已知PCNA和VEGF阳性的组织作阳性对照. 分别作HE染色及SP免疫组化染色, SP染色法按照SP试剂盒说明书进行. PCNA阳性者为细胞核有棕黄色颗粒. VEGF阳性者为细胞质和细胞膜有棕黄色颗粒. 阳性细胞半定量标准: 高倍镜下, 每张切片上、下、左、右及中5个高倍镜视野, "-"无阳性反应, "+"阳性细胞数1-20%, "++"阳性细胞数21-50%, "+++"阳性细胞数>50%.

统计学处理 采用χ²检验.

2 结果

PCNA在胞核呈现片状或散在分布, 在肝细胞肝癌、肝硬化组织和正常肝组织中的表达率分别为91.0%, 40.5%和14.3%.肝细胞肝癌和肝硬化组织之间、肝细胞肝癌和正常肝组织之间均有显著差异(P<0.05).PCNA表达与组织分化, 静脉内小癌栓形成, 年龄等指标无相关性(P>0.05).VEGF在细胞质和细胞膜呈局灶性的分布. 他在肝细胞肝癌、肝硬化组织、正常肝组织中的表达率分别为81.0%, 36.7%和23.8%, 肝细胞肝癌和肝硬化组织之间、肝细胞肝癌和正常肝组织之间均有显著差异(P<0.05).VEGF表达与组织分化, 年龄等指标无相关性(P>0.05), 而与静脉内小癌栓形成有相关性(r = 11.05, P<0.05, 表1).

表1 VEGF的表达与肝细胞肝癌的临床、病理指标间的关系.

VEGF	组织分化			静脉内癌栓		年龄
	I	II	III	-	+	<50	>50
-	6	8	5	15	4	7	12
+	7	11	6	9	16	12	13
++	13	16	3	11	13	9	15
+++	10	9	6	11	21	9	23
合计(n)	36	44	20	46	54	37	63
阳性(%)	83.3	81.8	75.0	67.4	92.6	81.1	81.0

3 讨论

PCNA是反映细胞增生状态的一个重要指标[3].PCNA在增生的肿瘤细胞中有表达, 研究发现当细胞进入G1和S期时都伴有不同程度的PCNA表达, 尤其是在S期, PCNA的表达比较高, 所以Landberg et al[4]认为PCNA蛋白是细胞增生周期S期的特异性标记, 他在胞核呈现片状或散在分布. 本结果显示, PCNA基因蛋白在肝细胞肝癌中表达阳性率(91.0%)显著高于结节性肝硬化组织(40.5%, P<0.05)和正常肝组织(14.3%, P<0.05). 提示PCNA基因蛋白的表达与肝脏肿瘤的恶性行为有关. 但PCNA与肝细胞肝癌的组织分化程度、年龄、静脉内小癌栓形成等临床病理指标无显著相关性. 这说明, 尽管PCNA蛋白的表达程度与肿瘤的增生程度成正比, 提示肿瘤的存在, 但尚不能把PCNA基因蛋白的表达与癌肿的分化程度, 静脉内小癌栓形成等因素相联系.

肿瘤的发生、发展和转归在很大程度和依赖于血管的形成. 多种实体肿瘤或细胞均有血管内皮生长因子(VEGF)蛋白高表达[5], VEGF主要分布在血管内皮细胞, 其表达水平与肿瘤中血管化程度相关. Brown et al[6]用免疫组化和原位杂交技术分析21例消化系统原发癌, 所有恶性上皮均明显表达VEGF mRNA及其蛋白, 与肿瘤坏死区紧密连接的癌细胞中表达更加显著, 肿瘤血管内VEGF染色阳性, 肿瘤以外的组织没有表达. 这表明, VEGF在消化系统肿瘤内血管形成中有一定作用. 本结果显示, VEGF在肝细胞肝癌中表达阳性率(81.0%)显著高于结节性肝硬化组织(36.7%, P<0.05)和正常肝组织(23.8%, P<0.05). 本研究还提示VEGF的表达与肝细胞肝癌组织分化程度, 年龄等临床病理指标无显著相关性, 这说明, 尽管VEGF的表达与肿瘤的恶性行为有关, 但是尚不能在VEGF的表达与临床病理指标间建立必然的联系, 至于VEGF和表达与肝细胞肝癌的静脉内微小癌栓之间存在的相关性是否与患者的预后有某种联系, 则需要进一步积累随访资料.

由于PCNA和VEGF往往在同一病例中有共同表达, 二者的表达有一定和互补性. 结合本次实验中所作的统计分析, 我们认为, 联合检测PCNA基因蛋白和VEGF可以对肝脏肿瘤患者的病变性质判断有一定的价值.

备注

编辑:潘伯荣 审读:张海宁

参考文献

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2.	Mayer B, Jauch KW, Gunthert U, Figdor CG, Schildberg FW, Funke I, Johnson JP. De-novo expression of CD44 andsurvival in gastric cancer. Lancet. 1993;342:1019-1022.  [PubMed]  [DOI]

3.	Scheumman GF, Hoang-Vu C, Cetin Y, Gimm O, Behrends J, von Wasielewski R, Georgii A, Birchmeier W, von ZurMuhlen A, Dralle H. Clinical significance of E-cadherin as a prognostic marker in thyroidcarcinomas. J Clin Endocrinol Metab. 1995;80:2168-2172.  [PubMed]  [DOI]

4.	Landberg G, Roos G. Antibodies to proliferating cell nuclear antigen as S-phase probes in flow cytometric cellcycle analysis. Cancer Res. 1991;51:4570-4574.  [PubMed]  [DOI]

5.	卞 修武, 史 景泉. 血管内皮生长因子及其受体在肿瘤血管生成中的作用及抗血管生成研究进展. 中华病理学杂志. 1997;26:248-250.  [PubMed]  [DOI]

6.	Brown LF, Berse B, Jackman RW, Tognazzi K, Manseau EJ, Senger DR, Dvorak HF. Expression of vascularpermeability factor (vascular endothelial growth factor)and its receptors in adenocarcinomas of the gastrointestinaltract. Cancer Res. 1993;53:4727-4735.  [PubMed]  [DOI]