修回日期: 2004-12-02
接受日期: 2004-12-18
在线出版日期: 2005-02-01
目的: 探讨和胃冲剂对胃肠动力影响的作用机制及急性毒作用.
方法: 分别腹腔注射左旋精氨酸(L-Arg)和左旋麻黄碱制造胃肠动力障碍小鼠模型, 观察和胃冲剂对两种模型胃肠动力及对正常大鼠血中胃动素(MOT)、一氧化氮(NO)的影响, 并进行和胃冲剂的急性毒理实验.
结果: L-Arg和麻黄碱均可以导致小鼠胃内残留率增高, 小肠推进比减低. 和胃冲剂1组与左旋精氨酸组相比胃内残留率减低(62.6217.1 vs 76.1215.09)、小肠推进比增高(51.8710.82 vs 44.617.93)(P<0.05); 和胃冲剂2组与麻黄碱组比较对小鼠胃肠动力的影响无统计学差异(P>0.05). 和胃冲剂组血浆MOT水平高于蒸馏水组(122.90±33.14 vs 87.25±14.75, P<0.05), 两组相比血清NO水平差异无统计学意义(P>0.05). 急性毒理实验中小鼠最大耐受倍数为240, 未见中毒症状或死亡现象发生.
结论: 和胃冲剂可提高血浆MOT水平, 调节NO合成, 对肾上腺素能受体无明显影响, 无急性毒副作用.
引文著录: 张庆芳, 李岩, 王启仪. 和胃冲剂促进胃肠动力机制的实验研究. 世界华人消化杂志 2005; 13(3): 401-403
Revised: December 2, 2004
Accepted: December 18, 2004
Published online: February 1, 2005
N/A
- Citation: N/A. N/A. Shijie Huaren Xiaohua Zazhi 2005; 13(3): 401-403
- URL: https://www.wjgnet.com/1009-3079/full/v13/i3/401.htm
- DOI: https://dx.doi.org/10.11569/wcjd.v13.i3.401
前期研究中李岩et al [1-5]以葡聚糖蓝作为标记物证实了砂仁能明显促进小鼠的胃排空功能, 进而证实了砂仁、鸡内金、神曲、麦芽合煎剂有明显增强小鼠胃肠动力的作用. 我们[1-2]的研究结果证实和胃冲剂(由砂仁、鸡内金、神曲、麦芽四味中药组成)可以有效地促进正常小鼠的胃肠动力, 含不同品种砂仁的和胃冲剂中, 含阳春砂和胃冲剂效果较优. 在此基础上, 我们进一步讨论和胃冲剂促进胃肠动力的作用机制及急性毒作用.
健康5周龄昆明系小白鼠120只, 体重19-21 g, ♂; 健康4周龄昆明系小白鼠20只, 体重17-19 g, 雌雄各半; 健康8周龄Wistar大鼠30只, 体重180-220 g, 雌雄各半. 以上均由中国医科大学附属第二医院动物室提供. 阳春砂购于亳州市远东药业有限公司(经辽宁中医学院采购办公室采办), 鸡内金、神曲、麦芽为市售, 以上药材均经辽宁中医学院鉴定为正品. 其他试剂和仪器: 羧甲基纤维素钠(中国医药集团上海化学试剂公司, 批号: F 20010518), L-Arg(上海康达氨基酸厂, 批号: 20020611), 左旋麻黄碱(沈阳市第一制药厂, 批号: 010601), NO试剂盒(南京建成生物工程研究所), MOT含量测定试剂盒(北京东亚免疫技术研究所), CAY-I型液体快速混合器(北京长安仪器厂), FT-613自动计算125I放免测量仪(北京核仪器厂), 紫外光可见光连续分光光度仪(法国S500P型). 营养性半固体糊制备[5-7]: 羧甲基纤维素钠10 g, 溶于250 mL蒸馏水中, 然后分别加入16 g奶粉, 8 g糖, 8 g淀粉, 每加一次搅拌均匀, 最后加入1mL碳素墨水混合成300 mL约300 g的半固体糊状物, 冰箱冷藏保存, 用前2 h取出, 恢复至室温.
1.2.1 胃肠运动障碍小鼠模型的建立及和胃冲剂对模型胃肠运动的影响: 小白鼠120只按体重分层、随机分成6组, 每组20只, 分别为蒸馏水1组, 蒸馏水2组, 左旋精氨酸(L-Arg)组, 麻黄碱组, 和胃冲剂1组, 和胃冲剂2组.
L-Arg组, 蒸馏水1组每日每只给予蒸馏水0.4 mL灌胃, 和胃冲剂1组每日每只给予和胃冲剂0.4 mL灌胃. L-Arg组, 和胃冲剂1组参照文献[8-9]给予腹腔注射L-Arg, 第1 d不注射, 第2 d 7.4 g/kg, 第3-6 d 3.7 g/kg, 蒸馏水1组第2 d开始给予腹腔注射同体积蒸馏水. 实验前小鼠禁食24 h, 各组动物每只分别给予相应药物0.4 mL灌胃, 1 h后, 灌服营养性半固体糊0.5 mL/只, 15 min后脱颈椎处死, 立即剖开腹腔, 结扎胃贲门和幽门, 从贲门处至回肠末端分离胃肠. 取贲门至回肠末端肠管, 将其自然拉直铺平, 分别测量从幽门括约肌至半固体糊前端及至回盲部的小肠长度, 计算幽门括约肌至半固体糊前端的距离占幽门括约肌至回盲部距离百分比(小肠推进比). 取胃, 用滤纸拭干后称重, 沿胃大弯剪开胃体, 洗去胃内容物后拭干, 称重[7], 计算胃内残留物占所灌半固体糊(0.5 g)的重量百分比(胃内残留率).
麻黄碱组和蒸馏水2组每日每只给予蒸馏水0.4 mL灌胃, 和胃冲剂2组每日每只给予和胃冲剂0.4 mL灌胃, 喂养7 d. 实验前所有小鼠禁食24 h, 分别灌胃相应药物0.4 mL.40 min后, 麻黄碱组和胃冲剂2组腹腔注射左旋麻黄碱(0.056 g/kg)[8], 蒸馏水2组腹腔注射同体积蒸馏水, 20 min后灌服营养性半固体糊0.5 mL/只, 30 min后脱颈椎处死, 按上述方法计算胃内残留率和小肠推进比.
1.2.2 大鼠血浆MOT和血清NO的测定: 正常Wistar大鼠30只, 按体重分层、随机分为2组, 每组15只. 分别为蒸馏水组(给予蒸馏水), 实验组(给予和胃冲剂溶液). 上述大鼠每只分别给予相应制剂2 mL灌胃, 1次/d, 喂养1 wk. 实验前所有大鼠禁食24 h(不禁水), 乌巴坦浅麻醉后经眶静脉丛采血4 mL. 分别采用放射免疫法测定血浆内MOT含量, 硝酸还原酶法测定血清NO含量.
1.2.3 和胃冲剂的急性毒理实验: 健康4周龄、体重17-19 g昆明系小白鼠共20只, 雌雄各半. 喂食300%含阳春砂和胃冲剂每只0.4 mL两次, 间隔2 h. 给药后自然喂养1 wk, 观察是否出现行动迟缓等中毒症状或死亡.
统计学处理 采用Excel统计软件t检验, 数值用均数±标准差表示, P<0.05认为有统计学意义, P<0.01认为差异显著.
L-Arg组胃内残留率增高, 小肠推进比减低, 与蒸馏水1组比较差异显著(P<0.05, 表1, 表2). 麻黄碱组小肠推进比减低及胃内残留率增高与蒸馏水2组相比, 统计学差异显著(P<0.01, 表1, 表2).
和胃冲剂1组与蒸馏水1组相比小鼠胃肠运动相近(P>0.05); 与L-Arg组比较, 胃内残留率减低, 小肠推进比增高, 统计学差异显著(P<0.05, 表1). 和胃冲剂2组与麻黄碱组相比对小鼠胃肠动力影响的差异无统计学意义(P>0.05); 与蒸馏水2组差异显著, 和胃冲剂2组小鼠胃肠动力弱(P<0.01, 表2).
正常对照组、和胃冲剂组血浆MOT水平分别为87.25±14.75 ng/L和122.90±33.14 ng/L. 后者血浆MOT水平明显高于前者(P<0.01). 正常对照组与和胃冲剂组之间血清NO水平差异不显著(P>0.05)(表3).
在1 wk时间内, 未见腹泻、便秘、皮疹、竖毛、消瘦、精神症状等中毒症状或死亡, 20只小鼠均健康活泼, 平均体重由19 g增至24.7 g. 小鼠最大耐受倍数 = (每只小鼠的耐受药量/小鼠平均体重)(成人平均体重60 000 g/成人每日用量 30 g) = 240. 远大于临床安全用药所需最大耐受倍数100.
NO是非肾上腺能和非胆碱能(NANC)神经递质, 内源性NO是由其前体L-Arg在NO合酶(NOS)的作用下生成的. NO在胃肠道病理生理方面具有广泛影响, 充当最终效应器神经元释放的神经递质和非神经细胞释放的递质. 有研究认为外周血NO含量升高与功能性消化不良患者胃排空延迟有关[11-13]. 腹腔注射NO供体L-Arg能抑制小鼠胃肠运动, 引起胃电节律失常, 其异常可被NOS抑制剂逆转. 我们采用小鼠连续6 d腹腔注射L-Arg[14]的研究表明, 与正常对照组相比, 模型组小鼠胃排空和小肠传输功能明显减弱, 说明通过注射L-Arg提供NO前体可以引起胃肠平滑肌的超极化和松弛作用[8,11], 使胃肠运动功能减低. 和胃冲剂对L-Arg所致小鼠胃肠运动的抑制有对抗作用, 抑制NO过度释放, 增加胃肠动力[15], 从而使胃排空和小肠推进功能恢复到正常水平; 我们对30只Wistar大鼠的实验研究发现, 该冲剂对正常大鼠血清NO的含量无明显影响, 提示和胃冲剂对胃肠运动的作用可能是通过参与调节疾病状态氮能神经、降低异常升高的NO水平来实现的, 而不影响正常状态氮能神经功能, 因此服用该冲剂不会因升高血清NO水平而产生不良反应.
我们在实验中, 给予和胃冲剂7 d后测定大鼠血浆MOT的水平, 结果发现给药组MOT水平高于正常对照组. MOT主要分布于十二指肠、上段空肠, 由M0细胞分泌, 其主要生理功能与消化间期移行性运动综合波(MMC)密切相关[16], 表现为影响胃肠道的传输, 加速胃的固体和液体的排空. MOT主要作用于胃平滑肌运动的起搏细胞(Cajal间质细胞, ICC)细胞膜上的受体[17], 通过ICC释放乙酰胆碱对胃肌收缩进行调节, 阿托品和六羟季胺均可消除MOT的周期性释放和MMC第III相的出现, 说明MOT作用与胆碱能神经有关. 我们的研究已证实了砂仁能明显促进小鼠的胃排空功能[1-5], 砂仁、鸡内金、神曲、麦芽合煎剂有明显增强小鼠胃肠动力的作用, 这种改善胃肠动力的作用机制可能与调节后胆碱能神经, 提高血浆MOT水平有关. 麻黄碱是肾上腺素能a、b受体兴奋剂, 能促进肾上腺素能神经末梢释放递质, 直接和间接地发挥拟肾上腺素作用, 抑制胃肠平滑肌运动. 我们的研究中, 麻黄碱对小鼠胃肠抑制作用显著, 与正常对照组比P<0.01. 实验中, 和胃冲剂不能对抗麻黄碱抑制胃排空和小肠传输的作用, 提示该冲剂促进胃肠动力的机制可能与肾上腺素能受体无关, 对胃部交感神经也无抑制作用.
在急性毒性实验中, 给药后小鼠一般状态良好, 毛色正常、体重增加、饮食及活动未见异常, 未发现明显毒性反应, 7 d内无一死亡, 最大耐受倍数为240, 大于临床用药所需最大耐受倍数100[18]. 这证明本药无急性毒副作用, 口服用药安全可靠.
编辑:张海宁
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