修回日期: 2005-03-25
接受日期: 2005-04-01
在线出版日期: 2005-05-15
目的: 研究半夏泻心汤对应激性胃溃疡的作用机理及其配伍规律.
方法: 采用水浸-束缚应激造成大鼠急性胃溃疡模型, 运用免疫组织化学方法观察半夏泻心汤全方及其各拆方组对其治疗作用及对各组大鼠脑组织和胃黏膜胃泌素表达的影响, 探讨半夏泻心汤的配伍规律及作用机理.
结果: 正常组胃泌素表达的面密度(脑组织0.0429±0.0052, 胃黏膜0.0220±0.0061), 模型组大鼠胃泌素的表达显著升高(胃黏膜0.0324±0.0047, 脑组织0.0602±0.0116 vs正常组, P<0.01).与模型组相比, 全方组(胃黏膜0.0416±0.0150, P<0.01)、苦降组(脑组织0.0234±0.0109, P<0.05, 胃黏膜0.0392±0.0077, P<0.01)、甘补组(脑组织0.0230±0.0082, P<0.05, 胃黏膜0.0410±0.0099, P<0.01)大鼠胃泌素的表达下降.
结论: 应激性胃溃疡大鼠脑组织和胃黏膜胃泌素表达增强, 半夏泻心汤及其拆方各组通过抑制胃泌素表达发挥治疗作用, 拆方研究显示甘补组、苦降组药物在本方中起主要作用.
引文著录: 张忠, 司银楚, 白丽敏, 吴海霞, 许红. 半夏泻心汤及其拆方对应激性胃溃疡大鼠胃泌素的影响. 世界华人消化杂志 2005; 13(10): 1223-1225
Revised: March 25, 2005
Accepted: April 1, 2005
Published online: May 15, 2005
N/A
- Citation: N/A. N/A. Shijie Huaren Xiaohua Zazhi 2005; 13(10): 1223-1225
- URL: https://www.wjgnet.com/1009-3079/full/v13/i10/1223.htm
- DOI: https://dx.doi.org/10.11569/wcjd.v13.i10.1223
胃泌素(gastric secretin)具有促进胃酸分泌及胃黏膜上皮细胞增殖的作用[1], 与胃溃疡的发生密切相关.本实验运用免疫组织化学方法观察半夏泻心汤及其各拆方组对急性胃溃疡大鼠脑组织神经细胞及胃黏膜胃泌素表达的变化, 研究半夏泻心汤及其各拆方组对胃泌素表达的影响.探讨半夏泻心汤全方及拆方各组的治病机理及其药性配伍规律.
1.1.1 实验动物及分组: 健康Wistar雄性大鼠90只, 购自中国医学科学院动物研究所, 体重200-250 g, 随机分为正常组、模型组、辛开药组、苦降药组、甘补药组、辛开苦降药组、苦降甘补药组、辛开甘补药组和全方组, 共9组, 每组为10只动物, 9组动物饲养条件相同.
1.1.2 实验用药: 购自北京同仁堂药店, 经北京中医药大学药用植物教研室鉴定, 均为正品.给药剂量采用李宇航et al[2]的方法:半夏55.7 g, 黄芩、干姜、人参、炙甘草各46.875 g, 黄连15.62 g, 大枣42 g.各组药物水煎提取2次, 每次30 min, 合并煎液, 并将所得药液过滤, 水浴加热蒸发浓缩至90 mL, 贮于冰箱.并依人单位体重生药量算得大鼠单位体重生药量后, 扩大10倍, 即:90 mL/60 kg×10 = 3 mL /200 g每天.
1.2.1 造模及处理: 急性胃溃疡模型的制作采用水浸-束缚应激(water immersion-restraint stress)模型[3], 将束缚的大鼠正立于21±1℃的水浴中, 使水面达其胸骨剑突水平, 经10 h后, 成功诱发出溃疡.第3 d, 模型组处死、取材、检验;除正常对照组用蒸馏水每只每天3 mL灌胃外, 其余各组分别用对应的治疗药液浓缩剂每只每天3 mL灌胃, 每日灌胃两次, 每次1.5 mL.连续给药3 d.
1.2.2 标本采集与染色: 取材前1 d晚上禁食, 次日早经0.1 g/mL水合氯醛(4 mL/kg体重)麻醉大鼠后, 断头处死.然后取脑与胃组织, 常规固定, 石蜡切片, 片厚6 μm.胃组织石蜡切片经常规脱蜡做HE染色, 树脂封片, 显微镜下观察胃黏膜形态的变化.脑与胃组织石蜡切片采用免疫组化ABC法进行胃泌素免疫组化反应, 切片常规脱蜡至水, 用10 mL/L甲醇-H2O2室温孵育30 min;92-98℃热修复10 min, 放至室温;蛋白酶K37℃消化20 min;100 mL/L正常羊血清37℃封闭孵育20 min;兔抗胃泌素(购于北京博士德生物技术有限公司, 工作浓度为1∶100)4℃过夜;生物素化羊抗兔IgG/Bio工作液37℃孵育1.5 h;加入S-A/HRP工作液37℃孵育1.5 h, 用DAB液显色, 常规脱水、透明、封片.以上除正常羊血清外, 其余各步骤间每次均用pH7.4的0.01 mol/L PBS液洗3次, 每次5 min.用正常羊血清代替一抗做阴性对照.胃泌素免疫组化结果, 每组随机选取3张切片, 每张切片选取3个视野, 用ＣMIAS８真彩病理图像分析系统(北京航空航天大学图像分析中心)进行分析, 统计每个视野阳性反应面密度.
统计学处理 所有数据用mean±SD表示, 两组间采用t检验进行统计分析.
模型组肉眼观察胃黏膜充血, 散在斑点状糜烂, 可见有多处出血点;正常大鼠胃黏膜HE染色呈浅红色, 表面光滑, 黏膜结构完整, 上皮为单层柱状上皮, 与胃小凹的上皮相连续, 固有层有大量腺体, 肌层完好, 未见炎细胞浸润;模型组HE染色观察黏膜明显充血, 水肿, 黏膜结构破坏, 表皮受损明显, 有的呈坏死脱落, 腺体紊乱及溃疡形成, 溃疡呈火山口状, 可深达黏膜肌层, 黏膜下层血管扩张, 有大量的淋巴细胞, 浆细胞浸润;与模型组比较, 各治疗组胃黏膜出血现象消失或减轻, 黏膜结构有不同程度的恢复, 其中甘补组, 辛苦组, 全方组恢复结构最好.
光镜下, 大脑组织含胃泌素的阳性神经细胞多数位于大脑额叶、顶叶、颞叶皮质П、Ш、VI层, 下丘脑背内侧、腹内侧核团, 阳性反应产物呈棕黄色颗粒, 染色较浅, 位于胞质内, 胞核不着色, 细胞形态大多呈圆形和椭圆形, 带有一个突起.以PBS代替一抗的对照片为阴性.与正常组相比, 模型组、辛开组、甘苦组胃泌素的表达升高(表1).与模型组相比, 辛开组、苦降组、甘补组、辛苦组、辛甘组胃泌素的表达下降(表1).
光镜下, 经免疫组织化学反应染色后, G细胞位于胃窦黏膜中下层, 也有少数位于黏膜上层, 阳性反应产物呈棕黄色或褐色颗粒, 位于胞质内, 胞核不着色, G细胞低倍镜下呈连续带状, 形态不一, 呈圆形或椭圆形.胃底和胃体黏膜阳性细胞较少, 以PBS代替一抗的对照片为阴性.与正常组相比, 模型组、辛开组、辛苦组、辛甘组胃泌素的表达明显增强, 而苦降组、甘苦组胃泌素的分泌减少.具有统计意义.与模型组相比, 苦降组、甘补组、甘补苦降组、辛开苦降组、全方组胃泌素的表达均下降(表2).
胃泌素是胃酸分泌素(gastric secretin)的缩写, 也是第一个被阐明结构的胃肠多肽激素[4-5].胃泌素的主要生理作用为促进胃酸分泌及黏膜营养作用[1,6], 他可以直接通过与壁细胞上胃泌素受体结合而促进胃酸分泌, 也可以通过刺激胃组织释放组胺来促进胃酸分泌.胃泌素对胃黏膜的营养效应主要表现为他能促进细胞分裂增值、DNA和RNA合成率增高、黏膜血流量增加、胃黏膜增厚、壁细胞数增加.胃酸在胃溃疡中的作用不容忽视, 应激状态时胃黏膜缺血, 胃黏膜屏障破坏, 实际反流入胃黏膜中的H+总量增加, 参与了溃疡的发生[7].这也可从各种抑酸剂治疗胃溃疡有确切疗效得到证实[8].另外, 机体对应激的反应首先发动于中枢神经系统, 因而中枢神经系统功能的改变在应激性溃疡的发病机制中无疑是很重要的因素.近年来发现中枢神经系统有胃泌素的表达, 胃泌素在中枢神经系统主要对消化道起兴奋作用, 已在脑内多个区域发现有胃泌素免疫反应性细胞和神经纤维, 证明胃泌素和胆囊收缩素在中枢通过迷走神经介导胃酸的分泌[9].近年对胃泌素神经调节机制及受体的研究越来越受到重视[10-12].本研究模型组大鼠胃黏膜及脑组织胃泌素表达增强, 说明胃泌素表达增强成为急性胃溃疡发病的一个主要环节.
半夏泻心汤是历代医家治疗脾胃病的有效复方.对其治病机理及药性配伍规律的研究有助于提高疗效, 指导临床实践.近10年来对半夏泻心汤进行了的一系列实验研究[13-15].本实验发现模型组胃泌素表达增强, 与模型组相比, 苦降组、甘补组、苦降甘补组、辛开苦降组、全方组胃泌素的表达均下降, 说明甘补药与苦降药可以抑制胃泌素的分泌, 而辛开药单独应用则无此作用, 任两组合用有一定的增效趋势, 辛苦配伍比辛甘配伍增效更加明显.大本太一et al[13]以测定对磷酸二酯酶的抑制活性为指标, 探讨本方中各味生药的配伍效果.结果表明本方抑制活性来自黄芩、甘草.李宇航et al[2]拆方研究半夏泻心汤的配伍意义, 综合评价疗效, 以全方组最佳, 其次为甘补组、辛开组、苦降组;任两组合用有一定的增效趋势.高艳青et al[14]探讨半夏泻心汤及其类方不同配伍对正常大鼠胃酸分泌的影响, 结果显示, 三方中对酸分泌贡献度最大的为大枣, 其次为半夏, 不同药味之间存在交互作用.本实验单从胃泌素指标来看全方组的作用不是最佳, 但从我们所做的一系列实验综合评价其疗效, 全方组最佳, 同时也说明胃溃疡的发生与愈合不只与胃泌素的表达相关, 而是多因素交互作用的结果.全方是从多层次、多靶点进行整体调节的综合作用, 需要多学科、多角度对其配伍进行深入研究.依单个药理指标评价全方有局限性.
编辑:张海宁
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