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世界华人消化杂志. 2005-05-15; 13(10): 1186-1189
在线出版日期: 2005-05-15. doi: 10.11569/wcjd.v13.i10.1186
胃癌组织中Bag-1和Bcl-2的表达及意义
王文勇, 唐红卫, 张志培, 韩彬, 高艳红, 马福成, 闫庆国, 赵一岭
王文勇, 张志培, 马福成, 闫庆国, 赵一岭, 中国人民解放军第四军医大学西京医院病理科 陕西省西安市 710033
唐红卫, 韩彬, 高艳红, 中国人民武装警察部队总医院消化内科 北京市 100039
王文勇, 男, 1963-09-18生, 四川省巴中市人, 汉族, 2000年第四军医大学, 实验师, 主要从事组织病理学研究.
基金项目: 国家自然科学基金资助课题, No. 39270744.
通讯作者: 王文勇, 710033, 陕西省西安市长乐西路169号, 中国人民解放军第四军医大学西京医院病理科. wlwang@fmmu.edu.cn
电话: 029-83373921 传真: 029-83255697
收稿日期: 2005-01-17
修回日期: 2005-03-01
接受日期: 2005-03-03
在线出版日期: 2005-05-15

目的: 探讨Bag-1和 Bcl-2 蛋白在胃癌组织中的表达及其临床意义.

方法: 胃癌患者术后组织标本92例, 运用免疫组织化学的方法检测Bag-1和Bcl-2蛋白的表达, 并以40例正常胃黏膜组织作对照.

结果: 胃癌组织Bag-1和Bcl-2蛋白的表达明显增高(60.9% vs 7.5%, 72.8% vs 10%, P均<0.01), 并且Bcl-2表达与胃癌分化程度相关(rs = 0.513, P<0.05). 胃癌组织中Bag-1表达与Bcl-2表达相关非常显著(rs = 0.522, P<0.01).

结论: Bcl-2通过促进细胞的转化和增生及抑制细胞的凋亡, 使GC呈现无限制的生长及恶性程度不断增高; Bag-1具有促进Bcl-2功能的作用; Bag-1和 Bcl-2的共表达可能预示胃癌患者预后不良.

关键词: Bag-1; Bcl-2; 胃癌; 免疫组化
引文著录: 王文勇, 唐红卫, 张志培, 韩彬, 高艳红, 马福成, 闫庆国, 赵一岭. 胃癌组织中Bag-1和Bcl-2的表达及意义. 世界华人消化杂志 2005; 13(10): 1186-1189
Expression of Bag-1 and Bcl-2 and its significance in gastric cancer
Wen-Yong Wang, Hong-Wei Tang, Zhi-Pei Zhang, Bin Han, Yan-Hong Gao, Fu-Cheng Ma, Qing-Guo Yan, Yi-Ling Zhao
Wen-Yong Wang, Zhi-Pei Zhang, Fu-Cheng Ma, Qing-Guo Yan, Yi-Ling Zhao, Department of Pathology, Xijing Hospital, the Fourth Military Medical University, Xi'an 710033, Shannxi Province, China
Hong-Wei Tang, Bin Han, Yan-Hong Gao, Department of Gastroenterology, General Hospital of Chinese People's Armed Police Forces, Beijing 100039, China
Supported by: National Natural Science Foundation, No. 39270744.
Correspondence to: Wen-Yong Wang, Department of Pathology, Xijing Hospital, the Fourth Military Medical University, 169 Changle West Road, Xi'an 710033, Shannxi Province, China. wlwang@fmmu.edu.cn
Received: January 17, 2005
Revised: March 1, 2005
Accepted: March 3, 2005
Published online: May 15, 2005

AIM: To investigate the expression of Bag-1 and Bcl-2 protein and its clinical significance in gastric cancer (GC).

METHODS: Immunohistochemistry was used to detect the expressison of Bag-1 and Bcl-2 protein in 92 patients with gastric cancer and 40 normal tissues as control.

RESULTS: Compared with normal mucosa, Bag-1 and Bcl-2 were over-expressed in gastric cancerous tissues (60.9% vs 7.5%, 72.8% vs 10%, P<0.01). The expression of Bcl-2 protein was significantly correlated with the differentiation degree (rs = 0.513, P<0.05) and the expression of Bag-1 was significantly associated with Bcl-2 level in gastric cancer (rs = 0.522, P<0.01).

CONCLUSION: The over-expression of Bcl-2 leads to uncontrolled growth and unceasingly increases of GC cells by accelerating cell transformation and proliferation. Bag-1 promotes the function of Bcl-2 and co-expression of Bag-1 and Bcl-2 may mean poor prognosis of GC patients.

Key Words: Bag-1; Bcl-2; Gastric cancer; Immunohistochemistry
0 引言

胃癌是我国常见恶性肿瘤之一，其发病机制尚未明了.近年来，凋亡障碍及其机制已成为肿瘤学研究的一个新热点.研究这些基因在肿瘤中的表达及相互作用，对于阐明肿瘤发生，发展的机制有着十分重要的意义.抗凋亡基因bcl-2是从B淋巴细胞中首先分离出的一种原癌基因，其产物可抑制淋巴细胞的凋亡过程，导致肿瘤的发生.现在已知bcl-2在一些非淋巴组织中也发挥类似作用，被认为是广义的抗凋亡癌基因[1-4].Bag-1是一种已经确认的多功能结合蛋白，具有与Bcl-2蛋白形成复合物促进抗细胞凋亡的作用.然而，Bag-1在胃癌中的表达与作用尚未见报道.我们采用免疫组织化学染色法，检测了胃癌组织中Bag-1和Bcl-2的表达，并就其意义进行了初步探讨 

1 材料和方法
1.1 材料

胃癌92例为西京医院外科手术标本其中高分化腺癌22例, 中分化28例, 低分化42例.标本均经40 g/L中性甲醛固定石蜡包埋HE染色病理诊断证实.兔抗人Bag-1、 Bcl-2多克隆抗体购自博士德公司Dako EnVision TMSystems(k4001)免疫组化检测试剂盒购自Dako公司.

1.2 方法

石蜡切片常规脱蜡至水30 mL/L H2O2甲醇封闭内源性过氧化物酶活性RT 30 min;10 mmol/L柠檬酸缓冲液中(pH 6.0)微波修复抗原;3 g/L BSA封闭非特异性背景37℃ 30 min;加兔抗人Bag-1、Bcl-2多克隆抗体(1∶50)4℃过夜;37℃复温1 h;加Dako EnVision TMSystems 试剂37℃ 30 min;以上各步骤间均用0.01 mol/L pH7.4 PBS缓冲液洗5 min×3;DAB呈色, 苏木精衬染, 脱水、透明、中性树脂封片, 镜下观察.同时设立已知阳性对照、空白对照及正常未免疫兔血清替代对照.细胞胞质, 胞核呈黄色者判为阳性.于400倍光镜下, 随机观察5个视野, 每个视野计数100个细胞并计算其平均数.免疫组化结果采用半定量计分法判定[3]:按阳性着色程度评分, 0分为无着色;1分为浅黄色;2分为棕黄色;3分为棕褐色.按阳性细胞占比例评分, 0分为<5%;1分为5-10%;2分为11-50%;3分为51-80%;4 分为>80%.二者乘积判定阳性结果:0分为阴性(-);1-4 分为弱阳性(+);5-8分为中度阳性(++);9-12分为强阳性(+++).

2 结果
2.1 Bag-1和Bcl-2蛋白表达

Bag-1阳性染色主要定位于肿瘤细胞的胞质内, 部分存在于细胞核中, 少数位于胞膜上(图1A).在92例胃癌组织中56例阳性(60.9%), 40例正常胃黏膜组织中3例阳性(7.5%), 两种组织的表达率差异显著(P<0.01).Bcl-2阳性反应产物主要位于细胞胞质内, 无核染色(图1B).92例胃癌组织中67例阳性(72.8%), 40例正常胃黏膜组织中4例阳性(10%), 两种组织的表达率差异显著(P<0.01, 表1).

表1 胃癌组织与正常胃黏膜中Bag-1和Bcl-2的蛋白表达.
分组nBag-1
Bcl-2
阳性阴性阳性阴性
胃癌9256b3667b25
正常40337436
bP<0.001 vs 正常组.
图1
图1 胃癌组织Bag-1和Bcl-2的表达EnVision×100. A: Bag-1; B: Bcl-2.
2.2 同临床参数的相关性

Bag-1在胃癌组织中的表达率与年龄、性别、肿瘤大小、肿瘤分化程度、TNM分期无关.虽然随着胃癌分化程度下降，Bag-1表达率上升(41%，64.3%，69.0%)，但无统计学意义.Bcl-2在不同分化程度胃癌组织中的表达率差异显著(P<0.05)，与其他临床参数无相关性(表2).胃癌组织中Bag-1和 Bcl-2双阳性表达有51例，双阴性表达20例，两分子表达相关显著(rs = 0.522, P<0.01，表3).

3 讨论

近年来, 随着细胞凋亡概念的确立, 人们对肿瘤的发生和发展产生了新的认识.肿瘤发生不仅与细胞过度增生有关, 也与细胞凋亡减少有关.目前已知有多种相关因子参与细胞凋亡调控[5-13], 其中Bcl-2家族的成员发挥重要作用[12-13].Bag-1是Bcl-2家族中相对较晚发现的凋亡调控分子具有多种生物学作用[14-25], 其在胃癌中的表达及其意义目前尚不清楚.我们应用免疫组化技术检测了胃癌中Bag-1与Bcl-2的表达, 探讨其表达与胃癌凋亡及分化的关系, 为胃癌的凋亡机制研究提供一定的理论依据.Bcl-2是一种原癌基因, 其编码一个26000的蛋白, 定位于细胞内质网膜、线粒体膜和核膜上, 是一种膜定位蛋白, 促进细胞由G1期向S期转化并修复染色体损伤, 或在细胞分化早期通过对抗前凋亡分子Bax延长细胞的生存期, 使细胞永生化, 与肿瘤的早期形成有关[27-30].Bcl-2家族成员在细胞凋亡调控中占据特殊的地位在多种肿瘤中都具有重要的作用.本研究显示, Bcl-2在胃癌中的表达明显增高, 并与与胃癌分化有关.Bag-1最初克隆时发现他是一种Bcl-2结合的抗凋亡分子为Bcl-2家族成员之一, 其后研究表明他是一种多功能蛋白[14-21], 他具有拮抗PDGF和HGF介导的凋亡作用可与肝细胞生长因子受体结合形成复合物诱导凋亡后此复合物迅速增加;其次Bag-1还可以与RAF-1, 激酶SIAH-1, 类固醇激素受体调节分子伴侣HSP70等多种蛋白发生作用;此外Bag-1蛋白还具有与细胞骨架蛋白作用促进肿瘤细胞迁移的功能.但凋亡调控作用仍是其诸多功能中最为重要的[24-25].Bag-1和Bad作为调控细胞凋亡的重要成员其在肿瘤中的研究一直受到重视.暨往的研究发现多种凋亡相关蛋白在胃癌中的表达都与肿瘤的分化存在一定的关系, Bag-1是否在胃癌中也有表达其表达水平与凋亡状况及肿瘤分化间有无关系值得探讨.Bag-1在大部分正常人体组织表达很弱或不表达但在大多数肿瘤细胞系如白血病乳腺癌前列腺癌直肠癌等均有表达表明Bag-1表达与肿瘤的恶性转化密切相关.Bag-1在各种肿瘤中的表达具有不同的意义.Townsend et al[17]研究发现160例乳腺癌中92例Bag-1免疫组化阳性;Turner et al[18]发现Bag-1在乳腺癌中表达较正常乳腺增强且有意义的是表达强者长期生存率高和无转移生存时间长.Rorke et al[19]则发现Bag-1表达与非小细胞肺癌的预后有关胞质强阳性者预后较好.Shindoh et al[20]发现在鳞状细胞癌中转移的病例较未转移者表达高在高级别的较低级别的表达高.本实验中Bag-1在高中低分化的胃癌中的表达阳性率逐渐增强表明细胞分化越低Bag-1的表达越趋于增强, 此结果与乳腺癌[17-18]和鳞状细胞癌[20]中的情况相似, 这可能由于较低分化的肿瘤恶性程度较高相应的抗凋亡机制也有所增强因此抗凋亡蛋白的表达较强.

编辑:潘伯荣 审读:张海宁

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