组织E-钙黏附素变化与结直肠癌根治手术的关系

摘要

目的: 通过检测结直肠癌患者血清E-钙黏附素(E-Cd)浓度和组织E-Cd的mRNA水平, 探讨E-Cd与结直肠癌浸润和转移的关联性.

方法: 应用酶联免疫黏附方法测定 28例结直肠癌患者血清可溶性E-Cd浓度; 应用点杂交法和计算机灰度扫描分析组织的mRNA灰度均值.

结果: 结直肠癌组血清E-Cd浓度显著高于对照组(P<0.001), Dukes C组或有淋巴结转移组明显高于Dukes A、B组或无淋巴结转移组(P均< 0.05), 切除瘤体后上述各组的血清E-Cd浓度均明显下降(P<0.01-0.05). 各组的组织E-Cd mRNA均值变化与血清E-Cd浓度的一致, 且两指标间具有明显的相关性(P<0.05).

结论: 血清、组织E-Cd可能与人结直肠癌的浸润深度和淋巴结转移密切相关.

关键词: N/A

N/A

N/A

Correspondence to: N/A

Received: February 7, 2004
Revised: March 9, 2004
Accepted: March 24, 2004
Published online: June 15, 2004

Abstract

N/A

Key Words: N/A

0 引言

E-钙黏附素(epithelial cadherin, E-Cd)又称上皮钙黏附素, 属钙黏附素超家族经典亚族成员[1], 他的表达程度与功能活性状态直接影响着肿瘤细胞的脱离和再附着(1)本文通过检测结直肠癌患者血清E-Cd浓度和组织E-Cd的mRNA水平, 旨在探讨结直肠癌侵袭性和根治手术对E-Cd水平的影响.

1 材料和方法

1.1 材料

选择确诊的结直肠癌患者28例, 据病理报告和手术中探查结果, 按 Dukes分期和淋巴结转移情况分组(见表1). 所有患者术前检查未发现心、肝、肺、肾等重要脏器的器质性病变, 由同一组医师施行结直肠癌根治术. 术前和术后1 wk未行放疗、化疗或生物治疗. 另择34名健康献血员作为对照组. 所有被检者年龄在78-31岁之间, 男女比为2:1, 各组间的年龄均数均无显著性差异 (P>0.05). 结直肠癌组取样时间为术前1 wk内、术后5-7 d.

表1 62例被检者血清E-Cd浓度(mg/L, mean±SD).

项目	n	术前		术后
对照组	34	3.73±0.75
结直肠癌组	28	8.91±1.65	P <0.01	5.17±1.81
临床分期Dukes C	17	9.83±1.37	P <0.01	5.69±0.95
		P<0.05		P>0.05
Dukes A、B	11	7.49±1.07	P <0.05	4.37±0.87
有淋巴结转移组	15	10.65±1.48	P <0.01	5.38±1.19
		P<0.05		P>0.05
无淋巴结转移组	13	6.90±1.19	P <0.05	4.93±0.79

1.2 方法

取被检者的空腹周边静脉血3 mL, 用酶联免疫黏附法(ELISA)复管测定血清E-Cd ,其检测药盒购自Sigma 公司, 具体方法参见Chan et al[2]报道. 取新鲜结直肠癌及距癌边缘5 cm以上的非肿瘤组织标本, 经液氮速冻后置-80 ℃保存; 异硫氰酸胍一步法抽提组织RNA, 以人类E-Cd cDNA(地高辛标记)探针作点杂交(dot blot)分析, 所得结果经计算机灰度扫描并自动测算出每个斑点的平均灰度均值(反映mRNA相对水平). 所有数据以mean±SD表示, 用t检验等进行统计处理.

2 结果

术前结直肠癌组血清E-Cd浓度显著高于对照组(P < 0.001), Dukes C组或有淋巴结转移组分别明显高于Dukes A、B组或无淋巴结转移组(P均< 0.05); 结直肠癌患者术后各组的血清E-Cd浓度均明显低于术前(P<0.01- 0.05), 但各组间的差异无显著意义(P>0.05), 术后结直肠癌组血清E-Cd浓度与对照组亦无明显统计学差异(P>0.05), 见(表1).

结直肠癌组(原发灶)的E-Cd mRNA灰度均值(215±47)明显高于非肿瘤组织组(71±19, n = 28, P<0.01, 后同), Dukes C组(265±59)或伴有淋巴结转移组(280±65)分别明显高于Dukes A、B组(138±39)或无淋巴结转移组(147±43, P均<0. 05), 见(图1).结直肠癌组织E-Cd mRNA水平与血清E-Cd浓度之间具有明显的正相关性(r = 0.782, P<0.05).

图1 各组标本Ecd mRNA均值比较图.

3 讨论

肿瘤浸润、转移等恶性表型系瘤细胞与细胞外基质相互作用的结果, 其关键步骤是瘤细胞脱离原发灶并再附着转移部位. E-Cd等钙黏附素主要介导正常和肿瘤组织中细胞与细胞间的黏附[3]. 目前对E-Cd表达的研究涉及多种人体肿瘤, 包括结直肠癌、肝癌、乳腺癌、前列腺癌等[4]. 尤其是国外一些研究小组据业与购建的E-Cd cDNA文库, 采用先进的分子生物学方法, 对结直肠癌等恶性肿瘤所进行的一系列实验和临床研究表明, E-Cd失活或基因突变与其侵袭性密切相关[4].

血清可溶性E-Cd系细胞内E-Cd的降解物, 是一种分子量为80 kDa的多肽. 他存在于正常人的血循环中, 文献报道其浓度为2.5-5.6 mg/L之间; 但恶性肿瘤患者中的浓度明显升高, 介于4.7-9.3 mg/L之间[2]. 有关结直肠癌患者的血清E-Cd浓度检测, 所见报道不多[5]. 本研究结直肠癌组的E-Cd浓度(8.91±1.65 mg/L)显著高于对照组(3.73±0.75 mg/L), Dukes C组或有淋巴结转移组血清E-Cd浓度明显高于Dukes A、B组或无淋巴结转移组, 切除原发灶后上述两组的指标均明显下降, 提示血清E-Cd浓度可能与人结直肠癌的浸润深度和淋巴结转移密切相关. 与Chan et al[2]对胃癌的研究结果一致, 他们发现胃癌患者血清可溶性E-Cd浓度的对数均值显著高于对照组, 且该指标的升高与胃癌的生长方式和远处转移密切相关.

一般将原发灶E-Cd的表达状况归结为4种类型[4]: (1)全部瘤细胞同质性地显著表达E-Cd; (2)瘤体内局灶性减低表达使E-Cd表达呈异质性分布, 或瘤体内均匀性降低; (3)E-Cd表达完全缺失; (4) 瘤细胞虽然能表达E-Cd却未能相互黏附. 大多数肿瘤属于前两型. 本文采用的点杂交法测定组织E-Cd mRNA的相对水平, 较免疫组化法更能反映E-Cd的生物活性. 所得结果表明, Dukes C型或伴有淋巴结转移的原发灶, 其 E-Cd mRNA表达水平分别明显高于Dukes A、B型或无淋巴结转移者. 提示原发灶E-Cd表达水平也影响着结直肠癌的浸润深度和淋巴结转移. 与文献[6]报道一致, 该文作者们应用免疫组化和原位杂交两种方法, 对30例散发性结直肠癌标本同时检测后发现, 无论是E-Cd的蛋白质表达还是mRNA表达水平, 其原发灶均较非肿瘤组织明显升高. 但有作者认为, 人和鼠结直肠癌组织中经免疫组化检测的E-Cd表达明显降低, 且与Dukes分期无关[7] ; 另一组作者则发现, 不仅原发灶E-Cd表达明显降低, 而且转移性淋巴结和肝转移灶中的E-Cd表达明显增强[8]. 造成上述相反结论的原因尚不明了, 可能与检测方法不同有关.

鉴于血清E-Cd浓度和组织E-Cd表达水平与结直肠癌的侵袭性密切相关, 并且健康对照者的血清E-Cd浓度明显低于结直肠癌患者、以及邻近非肿瘤组织的E-Cd mRNA水平显著低于结直肠癌组织. 作者认为, 全面分析纤维结肠镜活检组织或结直肠癌标本mRNA水平, 同时结合检测血清E-Cd浓度, 可能有助于评估结直肠癌的恶性演进状态, 对该类患者的早期诊断、综合治疗和预后具有重要的指导意义. 但E-Cd是否与结直肠癌特异性相关, 以及E-Cd能否成为特异性肿瘤标记物, 尚需从E-Cd的分子生物学等多方面作深入的探讨[7-8].

备注

$[Footnotes]

参考文献

1.	许 洪卫, 王 元和, 高 瀚. E-钙粘附素失活及其基因突变对恶性肿瘤侵袭倾向的影响. 癌症杂志. 1996;15:70-71.  [PubMed]  [DOI]

2.	Chan AO, Lam SK, Chu KM, Lam CM, Kwok E, Leung SY, Yuen ST, Law SY, Hui WM, Lai KC. Soluble E-cadherin is a valid prognostic marker in gastric carcinoma. Gut. 2001;48:808-811.  [PubMed]  [DOI]

3.	许 洪卫, 王 元和, 高 瀚. E-钙黏附素基因突变与胃癌恶性表型. 中国病理生理杂志. 1997;13:751-755.  [PubMed]  [DOI]

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8.	Ikeguchi M, Makino M, Kaibara N. Clinical significance of E-cadherin-catenin complex expression in metastatic foci of colorectal carcinoma. J Surg Oncol. 2001;77:201-207.  [PubMed]  [DOI]