修回日期: 2004-01-09
接受日期: 2004-02-01
在线出版日期: 2004-05-15
目的: 建立硫代乙酰胺(TAA)致大鼠轻微型肝性脑病(MHE)的动物模型.
方法: 24只♂SD大鼠随机分为TAA组和正常对照组, 各12只. TAA组应用TAA(每日200 mg/kg)隔日腹腔内注射, 共2次, 1 d后行脑干听觉诱发电位(BAEP)和门静脉内毒素检测.
结果: TAA组的I波潜伏期为1.52±0.07 ms, 显著高于正常对照组的1.29±0.09 ms (P<0.05); TAA组内毒素水平为0.36±0.04 Eu/mL, 显著高于正常对照组的0.07±0.02 Eu/mL (P<0.001); 若以1.45 ms (正常对照组I波潜伏期均值±1.96 标准差)为正常值, MHE发生率为83.3%(10/12).
结论: TAA致大鼠MHE模型研制成功, 适用于MHE实验治疗研究.
引文著录: 贾林, 张美华, 苏常青, 李泽. 硫代乙酰胺致大鼠轻微型肝性脑病模型的建立. 世界华人消化杂志 2004; 12(5): 1207-1208
Revised: January 9, 2004
Accepted: February 1, 2004
Published online: May 15, 2004
N/A
- Citation: N/A. N/A. Shijie Huaren Xiaohua Zazhi 2004; 12(5): 1207-1208
- URL: https://www.wjgnet.com/1009-3079/full/v12/i5/1207.htm
- DOI: https://dx.doi.org/10.11569/wcjd.v12.i5.1207
轻微型肝性脑病(minimal hepatic encephalopathy, MHE)过去多称为亚临床型肝性脑病(SHE), 指某些肝病患者缺乏临床常规手段可检测的大脑功能失调, 但具有可计量的智力检测和脑诱发电位异常[1-2], 迄今尚未见MHE动物模型的研究报道. 本文在预实验基础上, 采用小剂量硫代乙酰胺(TAA)腹腔内注射导致大鼠急性肝功能损害, 以脑干听觉诱发电位(BAEP)为MHE诊断指标, 旨在首次建立大鼠的实验性MHE模型及其诊断标准, 为MHE实验治疗研究提供动物模型.
清洁级SD♂大鼠24只, 质量220-250 g, 由中山大学实验动物中心提供. TAA (分析纯)和鲎试剂盒分别购自上海化学试剂公司和上海伊华临床医药科技公司. 应用丹麦丹迪公司生产的Keypoint型脑诱发电位仪检测大鼠BAEP.
1.2.1 模型制备: 根据Albrecht et al[3]方法改良制备. 24只SD大鼠随机分为TAA组和正常对照组, 每组12只. TAA组采用每日200 mg/kg剂量的TAA隔日行腹腔内注射(ip), 正常对照组则采用生理盐水ip, 共2次, 注射结束后1 d分别行BAEP和内毒素定量检测, 必要时辅以50 g/L葡萄糖盐水溶液5 mL ip进行补液.
1.2.2 BAEP检测及MHE的诊断: 大鼠注射TAA后, 如出现嗜睡、反应迟缓、自主性活动减少、共济失调、昏迷等症状之一, 可诊断肝性脑病(HE); 无症状大鼠则需行BAEP检测以排除MHE(采用Shapiro et al[4]方法).用20 g/L戊巴比妥40 mg/kg ip进行麻醉, 将其置于GS型金属组装电屏蔽隔音室内, 由神经功能检查室医师操作.指标包括大鼠BAEP I-IV的潜伏期及其峰间期, 每项指标重复操作2次以上, 待波形重复性好之后进行描记, 以确保实验数据的可靠性.预实验发现BAEP I波潜伏期较II-IV波潜伏期对药物治疗更为敏感和稳定, 因此把正常对照组BAEP I波潜伏期均值±0.96标准差作为正常值, 超过此值即可诊断MHE.
1.2.3 门静脉内毒素定量测定: 采用鲎试验(偶氮显色法).
1.2.4 肝病理检查: 取血后处死裸鼠, 留取鼠肝同一叶肝组织, 苏木素-伊红染色后光镜观察.
统计学处理 两组计量资料和率的比较分别采用t检验和χ2检验.
正常组大鼠活动灵活, 反应敏捷. SD大鼠注射TAA后, 未见嗜睡、反应迟缓、共济失调、昏迷等HE症状, 也无大鼠死亡; TAA组的I波潜伏期为1.52±0.07 ms, 显著高于正常对照组的1.29±0.09 ms (P<0.05); 若以1.45 ms(正常对照组I波潜伏期均值±.96标准差)为正常值, MHE发生率为83.3%(10/12).
TAA组的内毒素水平为0.36± 0.04 Eu/mL, 显著高于正常对照组的0.07±0.02 Eu/mL (P<0.001), 提示TAA组存在显著的高内毒素血症.
肉眼下见TAA组鼠肝普遍肿大, 表面较粗糙, 呈暗红色; 正常组鼠肝则未见异常. 光镜下见正常组鼠肝组织肝小叶结构完整,肝细胞无变性、坏死; TAA组大部分肝脏有大面积空泡变和炎性细胞浸润; 部分肝脏呈现以中央静脉为中心的肝小叶坏死(条块状坏死和桥接坏死), 个别呈弥漫性片状坏死.
HE最新共识认为HE范畴为一连续阶段, 包含从MHE(0期)到肝昏迷(IV期)等不同程度类型, MHE为HE广义概念的一部分[1-2]. HE动物模型的制备方法很多, 适合不同研究目的. 文献报道TAA致鼠急性肝衰竭模型具有良好的重复性和可行性, 已成为目前国内外最成熟和最常用的HE模型,其中以TAA隔日腹腔内重复注射(2-3次)为公认的制备常规, TAA总量波动于500-1 200 mg/kg, TAA剂量-症状关系也未达成共识[3].
脑诱发电位(EP)和智力检测为MHE患者的主要诊断手段, 由于动物难行智力检测, 因此EP成为MHE动物模型的惟一识别手段.鉴于近年动物EP检测技术的广泛应用[4-5], 建立动物MHE模型及其诊断标准的时机已日渐成熟, 国内外少数学者进行了初步尝试. Albrechit和Hilgier et al学者[3,6]提出了MHE模型制备方法,认为采用TAA(250 mg/kg)隔日ip大鼠2次后停药, 第21 d后即可制成鼠MHE模型, 由于未行EP检测致使动物MHE诊断不明, 仍为MHE假想模型.2000年, 国内李瑞军et al[7]首次把EP检测应用于乳果糖对TAA致兔HE/MHE的防治研究, 但较粗略和笼统, 未建立MHE模型和确立动物MHE的诊断标准等.
本文前期研究显示TAA剂量与HE发生率呈正相关, 250 mg组(250 mg/kg隔日ip 2次)的临床HE发生率接近100%, 明显高于200 mg组(200 mg/kg体重隔日ip 2次), 因此, 本文采用小剂量TAA制备鼠MHE模型. 研究显示小剂量TAA (200 mg/kg体重隔日ip 2次)既可显著延长鼠BAEP I波的潜伏期和产生高内毒素血症, 又无临床HE和鼠死亡发生; 若以正常对照组BAEP I波潜伏期均值1.96标准差作为MHE诊断标准,本组SD大鼠的MHE确切发生率为83.3%, 适用于MHE疗效学的定量研究.
| 3. | Albrecht J, Hilgier W, Zielińska M, Januszewski S, Hesselink M, Quack G. Extracellular concentrations of taurine, glutamate, and aspartate in the cerebral cortex of rats at the asymptomatic stage of thioacetamide-induced hepatic failure: modulation by ketamine anesthesia. Neurochem Res. 2000;25:1497-1502. [PubMed] [DOI] |
| 4. | Shapiro SM. Somatosensory and brainstem auditory evoked potentials in the Gunn rat model of acute bilirubin neurotoxicity. Pediatr Res. 2002;52:844-849. [PubMed] [DOI] |
| 5. | Morales-Martinez Jde J, González-Piña R, Alfaro-Rodríguez A. Brainstem auditory response in the reserpinized rat. Proc West Pharmacol Soc. 2002;45:68-70. [PubMed] |
| 6. | Hilgier W, Zielińska M, Borkowska HD, Gadamski R, Walski M, Oja SS, Saransaari P, Albrecht J. Changes in the extracellular profiles of neuroactive amino acids in the rat striatum at the asymptomatic stage of hepatic failure. J Neurosci Res. 1999;56:76-84. [PubMed] [DOI] |