大肠癌 Open Access
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世界华人消化杂志. 2003-09-15; 11(9): 1382-1384
在线出版日期: 2003-09-15. doi: 10.11569/wcjd.v11.i9.1382
直肠癌组织CD44v6, DNA含量的联合检测及临床意义
丁志杰, 单吉贤, 都姝妍
丁志杰, 单吉贤, 中国医科大学附属第一医院肿瘤科 辽宁省沈阳市 110001
丁志杰, 男, 1966-06-03生, 辽宁省辽中县人, 汉族. 1990年中国医科大学本科毕业, 医学博士, 副主任医师, 主要从事消化道肿瘤的临床研究.
都姝妍, 中国医科大学附属第一医院中心实验室 辽宁省沈阳市 110001
通讯作者: 丁志杰, 110001, 辽宁省沈阳市和平区南京北街155号, 中国医科大学附属第一医院肿瘤科. zhijieding@sina.com
电话: 024-23256666-6227
收稿日期: 2002-11-29
修回日期: 2002-10-20
接受日期: 2002-12-25
在线出版日期: 2003-09-15

目的

探讨直肠癌CD44v6表达情况和DNA含量及其临床意义.

方法

应用流式细胞术同时检测40例直肠癌及10例正常组织中CD44v6表达量和DNA含量.

结果

直肠癌中CD44v6表达量和DNA含量均显著高于正常组织(70% vs 0%，1.11±0.6 vs 0.9±0.65，P <0.01)，肿瘤组织中CD44v6阳性表达与直肠癌浸润深度(0% vs 50% vs 80% vs 100%)、淋巴结转移(93.3% vs 56.0%)及Dukes分期(56.0%vs 93.3%)有关(P <0.05); DNA异倍体与淋巴结转移(100% vs 68%)及Dukes分期(68% vs 100%)有关(P <0.05). CD44v6表达与肿瘤细胞DNA倍体无关(85.7% vs 68.7%，P >0.05).

结论

CD44v6表达异常及DNA倍体异常在直肠癌进展和浸润转移中起作用，联合检测CD44v6和DNA倍体可作为预测直肠癌进展程度、淋巴结转移有用的指标.

关键词: N/A
引文著录: 丁志杰, 单吉贤, 都姝妍. 直肠癌组织CD44v6, DNA含量的联合检测及临床意义. 世界华人消化杂志 2003; 11(9): 1382-1384
Simultaneous detection of CD44v6 expression and DNA content in rectal cancer and its clinical significance
Zhi-Jie Ding, Ji-Xian Shan, Shu-Yan Du
Zhi-Jie Ding, Ji-Xian Shan, Department of Oncology, First Hospital of China Medical University, Shenyang, 110001, Liaoning Province, China
Shu-Yan Du, Department of center laboratory, First Hospital of China Medical University, Shenyang, 110001, Liaoning Province, China
Correspondence to: Zhi-Jie Ding, Department of Oncology, First Hospital of China Medical University, Shenyang, 110001, Liaoning Province, China. zhijieding@sina.com
Received: November 29, 2002
Revised: October 20, 2002
Accepted: December 25, 2002
Published online: September 15, 2003

AIM

To explore CD44v6 expression and DNA content and the ir significance in the progress of rectal cancer.

METHODS

In 40 cases of rectal cancer and 10 cases of normal intestinal tissues, CD44v6 expression and DNA content were detected simultaneously by flow cytometry.

RESULTS

The CD44v6 expression and DNA content in rectal cancer were significantly higher than those in normal tissue (70% vs 0%, 1.11±0.6 vs 0.9±0.65, P <0.01). The positive expression of CD44v6 was closely related to the depth of invasion (0% vs 50% vs 80% vs 100%, P <0.05) lymphnode metastasis (93.3% vs 56.0%, P <0.05) and Dukes stage (56.0% vs 93.3%, P <0.05). The DNA aneuploidy in cancer was also related to lymph node metastasis (100% vs 68%, P <0.05) and Duke's stage (68% vs 100%, P <0.05). The expression of CD44v6 did not show any correlation with DNA ploidy of tumor cells (85.7% vs 68.7%, P >0.05).

CONCLUSION

The abnormal expression of CD44v6 and DNA aneuploidy plays an important role in the development, invasion and metastasis of rectal cancer. The detection of CD44v6 and DNA content simultaneously may serve as a useful indicator to predict progress of tumor and lymph node metastasis.

Key Words: N/A
0 引言

CD44为细胞黏附分子，存在于多种恶性肿瘤中，其多种变异拼接体特别是CD44v6的表达与肿瘤转移复发有密切关系. DNA含量异常是恶性肿瘤的特征性改变之一，能反映肿瘤的生物学特性，我们采用流式细胞术联合检测40例直肠癌中CD44v6的表达及DNA含量，探讨二者在直肠癌发生发展及转移中的意义.

1 材料和方法
1.1 材料

直肠癌手术标本40例，男13例，女27例，平均年龄61岁. 所有病例均经组织病理学证实. 另取10例癌远端正常肠组织作为对照组.

1.2 方法

取新鲜标本，用眼科剪刀剪碎，细胞悬液经400目尼龙网过滤，PBS冲洗离心，去上清后调整细胞数为1×109/L，加入FITC标记的小鼠抗人CD44v6单克隆抗体VFF-18 (Benoler Medsystem，1:20)，另一管加入阴性对照FITC标记的小鼠IgG1(Becton Dickinson，1:20)，4 °C，避光30 min，0.01 mol/L PBS冲洗离心后加10 g/L多聚甲醛固定5 min，离心后加入PI染色液(PI 5 mg，RNase 2 mg，Triton X-100 1 mL，枸橼酸钠100 mg，0.01mol/L PBS 65 mL，加蒸馏水至100 mL; pH7.2-7.6 )1 mL，4 °C，避光30 min后上机检测. 流式细胞仪为FACscan (Becton Dickinson)，200 mW氩激光(488 nm)，同时检测PI红色荧光(DNA)和FITC绿色荧光(CD44v6)信号，采集10 000个细胞，所测数据用Cellquest软件处理. 以DNA指数(DNA index，DI)判断DNA含量，用正常人体周围血淋巴细胞DNA含量作为参考标准，公式为: DI=(样品G0/G1期DNA量平均值)/(标准二倍体DNA量平均值). DI=1.0±0.1为二倍体肿瘤，DI≠1.0±0.1为异倍体肿瘤. 以荧光指数(fluorescence index，FI)表示CD44v6的相对含量，公式为: FI=(癌组织CD44v6平均荧光强度-对照组平均荧光强度)/正常组织中CD44v6平均荧光强度，如FI>2.0为CD44v6阳性，FI<2.0为阴性.

统计学处理 采用SPSS 10.0软件对计量资料进行t 检验，计数资料采用x2检验.

2 结果

癌组织中CD44v6的表达量及DNA含量均显著高于正常组织(表1和图1-4)，40例直肠癌中，CD44v6阳性率为70% (28/40)，异倍体检出率为80% (32/40). CD44v6阳性表达与肿瘤浸润深度、淋巴结转移及Dukes分期有关(P <0.05)，和大体类型、生长方式及病理类型无关. DNA异倍体也与淋巴结转移及Dukes分期有关(P <0.05)，(表2). 在CD44v6阳性的28例标本中，异倍体24例(85.7%)，CD44v6阴性的12例中，异倍体8例(68.7%)，二者经统计学处理，无显著性差异(x2=0.9，P >0.05).

表1 直肠组织中CD44v6和DNA(mean±SD).
组织nFICD44v6阳性率/%DI异倍体率/%
癌402.68±1.48b70b1.11±0.60a80b
正常100.55±0.1600.90±0.650
aP <0.05, vs 正常;
bP <0.01, vs 正常.
图1
图1 示同一癌组织内实验管(Ca) CD44v6表达量明显高于对照管(Neg).
表2 CD44v6、DNA倍体与临床病理因素关系.
病理因素nCD44v6阳性率/%DNA异倍体率/%
大体类型 隆起型118 (72.7)10 (90.91)
溃疡型2920 (69.0)22 (75.9)
生长方式 团块状2920 (69.0)22 (75.9)
巢状118 (72.7)10 (90.9)
病理类型 高分化腺癌1912 (63.2)15 (79.0)
中分化腺癌76 (85.7)5 (71.4)
低分化腺癌21 (50.0)2 (100.0)
乳头状腺癌97 (77.8)7 (77.8)
黏液腺癌32 (66.7)3 (100.0)
浸润深度 黏膜层100
肌层126 (50.0)9 (75.0)
浆膜下2520 (80.0)21 (84.0)
浆膜外22 (100.0)a2 (100.00)
淋巴结转移 有1514 (93.3)15 (100.0)
无2514 (56.0)a17 (68.0)a
Dukes分期 A/B2514 (56.0)17 (68.0)
C/D1514 (93.3)a15 (100.0)a
aP <0.05 vs组内比较.
图2
图2 示正常癌旁组织DNA直方图 未见异倍体峰.
图3
图3 示癌组织DNA直方图出现三倍体峰(3C).
图4
图4 示癌组织DNA直方图出现六倍体峰(6C).
3 讨论

肿瘤侵袭和转移是恶性肿瘤最重要的生物学特性，肿瘤侵袭转移涉及多个环节，其中肿瘤细胞表面的黏附分子起着重要作用. CD44v6作为黏附分子CD44的变构体，通过迁移，外渗，增生等形式赋于肿瘤细胞转移潜能[1]. 研究表明CD44v6可能影响大肠癌细胞骨架肌动蛋白的分布，聚合，解聚的过程来增强癌细胞运动能力，促使其容易发生转移[2]. 认为CD44v6表达是大肠癌细胞形成的特征性变化，与癌细胞穿透肠壁有关[3]. 目前关于CD44v6在大肠癌发生发展过程中作用尚存在分歧. 部分学者认为CD44v6绝大部分表达于腺瘤、腺癌中，与大肠癌发生有关，与反映肿瘤进展的临床病理因素及预后无关[3-7]. 另外一些研究则表明CD44v6不仅与肿瘤分化程度、Dukes分期、淋巴结转移有关[8,9]，而且与肝转移、术后复发及生存率有关[10-13]，认为CD44v6是大肠癌转移相关因子. 我们采用流式细胞术可定量检测肿瘤中CD44v6表达情况，结果表明癌组织CD44v6表达程度显著高于正常组织，CD44v6表达阳性率为70% (28/40)，而正常组织中未见CD44v6表达. 40例肿瘤组织中CD44v6阳性表达与肿瘤浸润深度、淋巴结转移及Dukes分期有关(P <0.05)，与大体类型、生长方式及病理类型无关，此结果与国内外报道基本一致[8,9,14,15]，提示CD44v6与直肠癌发生发展及转移有关. 尤其是淋巴结阳性及肿瘤侵袭浆膜组中CD44v6 阳性表达率明显高于淋巴结阴性及肿瘤局限于黏膜下或肌层，从而在基因水平上证实了CD44v6与直肠癌局部浸润远处转移高度相关.

恶性肿瘤组织基本生物学特性是肿瘤细胞处于无限分裂增生状态，表现为DNA含量的异常改变，呈现异倍体状态. 异倍体作为一种遗传不稳定形式，有可能提高肿瘤细胞产生异质性的能力[16]，因此DNA倍体状况是反映大肠癌生物学行为重要因素[17] . 许多研究表明大肠癌细胞中不仅DNA倍体异常，而且其DNA倍体形式和细胞周期增生指数还与肿瘤大小、分期、淋巴结转移、血管侵袭以及预后有关[18-20]. 本组资料中，40例肿瘤标本中32例检出异倍体，异倍体率(80%)显著高于正常组织，统计分析还表明肿瘤异倍体与淋巴结转移及Dukes分期有关，低分化腺癌和黏液腺癌中异倍体率达100%，高于高、中分化腺癌(76.7%)，肿瘤侵犯浆膜下或浆膜者异倍体率也较局限于黏膜下或肌层者高，但二组均无显著性差异. 结果提示肿瘤细胞DNA倍体与肿瘤转移有关，异倍体肿瘤较二倍体肿瘤更容易发生淋巴结转移，病期偏晚，预后较差. 本实验结果还表明CD44v6阳性者中异倍体率(85.7%)与 CD44v6阳性者中异倍体率(66.7%)无显著性差异，说明CD44v6 的表达与肿瘤细胞DNA倍体无关，各自为一个独立的预后影响因素.

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