paxillin在胃腺癌中的表达及临床意义

摘要

目的

研究焦点黏附相关调节蛋白paxillin在胃癌组织中的表达及其与胃癌细胞分化、浸润及转移的关系.

方法

应用免疫组化SP法检测80例胃癌和40例淋巴结转移灶中paxillin的表达情况.

结果

paxillin在胃中、低分化腺癌组织中的表达显著高于高分化腺癌, 进展期胃癌组织中显著高于早期胃癌, 胃癌原发灶中显著高于淋巴结转移灶.

结论

paxillin可能在胃癌细胞的分化、浸润和转移中起着重要作用.

关键词: N/A

N/A

N/A

Corresponding author: N/A

Received: November 12, 2002
Revised: November 20, 2002
Accepted: November 29, 2002
Published online: October 15, 2003

Abstract

N/A

Key Words: N/A

0 引言

paxillin是一种焦点黏附相关蛋白, 而焦点黏附物(也称为黏着斑)是细胞与细胞外基质的接触点, 构成胞外基质(ECM)与细胞骨架联系纽带, 也是信号转导的主要部位, 促进信号从细胞外基质经整合素途径向细胞内传递[1]. 多项研究表明, paxillin定位于黏着斑, 有参与动态调节焦点黏附、调节细胞的移动和播散等功能[2,3], 而肿瘤的浸润和转移与细胞的黏附力、移动力的改变直接相关, 所以paxillin与肿瘤细胞的浸润和转移必定存在着一定联系. 本文采用免疫组化方法检测胃癌组织及淋巴结转移灶中paxillin的表达, 旨在探讨paxillin与胃癌细胞分化、侵袭和转移的关系.

1 材料和方法

1.1 材料

收集我科1999年/2001年存档的手术切除的胃腺癌标本80例, 有相应淋巴结转移灶者40例, 所有病例均经病理确诊. 其中男63例, 女17例, 年龄27-80岁, 中位年龄55.4岁. 标本均经100 ml/L中性甲醛液固定, 石蜡包埋, 连续切片4 μm厚.

1.2 方法

HE染色用于肿瘤常规病理诊断(包括组织学分类、分级、浸润深度及转移状况). 免疫组化SP的操作步骤按试剂盒说明进行, 所用抗paxillin抗体及SP试剂盒、EDTA抗原修复液均购于福州迈新生物技术公司, 抗体和试剂盒均为即用型. 使用已知阳性组织作为阳性对照, 用PBS取代一抗作阴性对照. 免疫组化染色结果的评估标准: paxillin为胞质着棕黄色. 每例随机观察10个高倍(×400)视野, 计算阳性细胞百分率, 阳性细胞数大于10％者定为阳性, 小于或等于10％或缺乏者定为阴性.

统计学处理 SPSS10.0统计软件分析数据, 采用x²检验.

2 结果

2.1 paxillin在胃腺癌组织中的表达

paxillin在胃癌组织中主要定位于肿瘤细胞胞质. 表1示paxillin在男女病例之间表达无差异. 在胃腺癌组织中随分化程度降低, 其阳性表达率逐渐增高, 中、低分化腺癌显著高于高分化腺癌, 进展期(浸润至肌层、全层)胃癌组织中的表达显著高于早期胃癌(黏膜内癌或黏膜下癌) (P<0.05). 有淋巴结转移者表达较无淋巴结转移者高, 但无统计学差异.

表1 paxillin在胃腺癌组织中的表达.

临床病理参数	n	paxillin		阳性率(%)	P值
		-	+
性别
男	63	23	40	63.5
女	17	5	12	70.6	P >0.05
分化程度
高分化	27	15	12	44.4
中分化	23	7	16	69.6	P <0.05
低分化	30	6	24	80.0
浸润深度
黏膜内癌或黏膜下癌	10	7	3	30.0
肌层	15	4	11	73.3	P <0.05
全层	55	17	38	69.1
转移情况
无淋巴结转移	40	16	24	60.0	P >0.05
有淋巴结转移	40	12	28	70.0

2.2 paxillin在胃腺癌原发灶与淋巴结转移灶中的表达

表2示paxillin在胃原发灶中的表达高于淋巴结转移灶, 其差异具有统计学差异, 在有淋巴结转移的原发灶中的表达显著高于与之配对的淋巴结转移灶(P<0.05).

表2 paxillin在胃腺癌原发灶与淋巴结转移灶中的表达.

病理学类型	n	paxillin		阳性率(%)	P值
		-	+
部位
所有原发灶	80	28	52	65.0
淋巴结转移灶	40	23	17	42.5	P <0.05
部位
对应原发灶	40	12	28	70.0
淋巴结转移灶	40	23	17	42.5	P <0.05

2.3 paxillin在淋巴结转移不同转移阶段的表达

根据Shigetomi关于淋巴结转移阶段的划分标准[4], 结合本实验, 我们根据癌细胞所占的淋巴结最大横切面的面积百分率将淋巴结转移阶段简化为早期转移和晚期转移两级(以50％为分界点). 研究发现paxillin在淋巴结转移的不同阶段其表达也具有差异性, 在转移的晚期阶段显著高于早期阶段(表3).

表3 paxillin在早期淋巴结转移灶与晚期转移灶中的比较.

病理学类型	n	paxillin		阳性率(%)	P值
		-	+
晚期转移灶(≥50 %)	24	10	14	58.3
早期转移灶(<50 %)	16	13	3	18.8	P <0.05

3 讨论

焦点黏附物的分子分为两组: 结构蛋白和调节蛋白. 前者含量丰富, 包括张力蛋白、纽蛋白、α－辅肌蛋白等; 而调节蛋白则含量相对较少, 包括黏着斑激酶(focal adhesion kinase, FAK)、paxillin、p130CAS[5].

paxillin最早是在被src基因转染的细胞中发现的, 是迄今为止所发现的惟一能与癌基因结合的含酪氨酸的焦点黏附调节蛋白, 其分子量为68-70 kD. 有研究表明其在胚胎的发育过程中发挥至关重要的作用, paxillin等位基因缺失的小鼠易发生胚胎期死亡, 而该基因缺失的成纤维细胞表现为细胞迁移能力缺陷, 从而表明paxillin具有控制细胞播撒和移动的能力[2]. 进一步研究表明paxillin含有一些介导蛋白间相互作用的基序: 包括LD(富含亮氨酸)重复序列、LIM区域(富含半胱氨酸、类似双锌指区域)及src同源区2(SH2)和src同源区3 (SH3) , 这些基序能与整合素(如β链和α4链)的胞质区、细胞骨架蛋白、酪氨酸激酶(如FAK)、丝氨酸/苏氨酸激酶、GTP酶激活蛋白及其他一些调节蛋白结合, 形成特异的信号分子复合物, 将信号向下游传递[2,6,7]. 与之结合的细胞骨架蛋白都是参与胚胎发育、损伤修复、肿瘤转移相关的细胞迁移活动所必须的, 如肌动蛋白、微管蛋白、纽蛋白、actopaxin等[8]. 虽然paxillin本身不表现酶的活性, 但因其含有一系列的结合部位, 决定了paxillin可作为一种"码头"或"脚手架"、反应底物或是为信号反应提供场所来发挥作用.

细胞的迁移过程是其前端新的焦点黏附不断形成和以前黏附点随之消失的动态过程[9]. 关于paxillin对细胞的迁移力、侵袭力等的调节方向存在不同的见解. 如Vadlamudi et al [9]研究发现上调paxillin的表达能够使没有侵袭性的乳腺癌细胞系向有侵袭性的表型转化. 而另有研究表明paxillin的表达缺失或低表达会使小细胞肺癌更具有侵袭性[10]. 这可能与他们的实验设计、组织存在差异等有关. 本研究显示paxillin在中、低分化胃腺癌组织中表达显著高于高分化腺癌, 表明paxillin与胃腺癌的分化程度有关. 而进展期胃癌中paxillin表达的阳性率显著高于早期胃腺癌, 这表明paxillin与肿瘤的浸润也存在一定的联系, paxillin可能是具有促进肿瘤细胞移动的作用, 但浸润肌层者paxillin表达较全层浸润者高, 其确切机制尚待进一步研究. 在整合素信号途径中位于paxillin上游、与paxillin直接作用的酪氨酸激酶FAK也一种调节细胞黏附、迁移、凋亡和锚定不依赖性生长的关键蛋白, 其在多种恶性肿瘤中过度表达, 其过表达能促进paxillin的酪氨酸磷酸化[2,11-13]. 苏剑敏et al研究发现FAK在低分化及进展期胃癌中的表达较高、中分化及早期胃癌组织中高[14], 本研究检测paxillin在胃癌中的表达与他们检测的FAK的表达有相近的趋势, 但我们研究的病例中有淋巴结转移者与无淋巴结转移者的paxillin表达阳性率无统计学差异, 尽管前者较后者高.

目前国内外关于肿瘤原发灶及淋巴结转移的不同阶段的对照性研究较少见. Shigetomi于1992年将淋巴结转移阶段分为四级, 0级为癌细胞局限在淋巴结周围的淋巴管内; 1级为癌细胞仅见于边缘窦; 2级为癌细胞侵及淋巴结皮质但不超过50％; 3级为癌细胞占据淋巴结的50%以上[4]. 本实验中我们根据癌细胞所占的淋巴结最大横切面的面积百分率将淋巴结转移程度做了适当简化. 本组胃癌原发灶中paxillin的表达较淋巴结转移灶中高, 晚期淋巴结转移灶中paxillin的表达显著高于早期转移灶. 我们推测这可能与癌细胞的黏附力下降、迁移力增加易于使其从原发灶脱离出来而进入血液循环, 而进入转移灶后黏附力增加、迁移力下降便于其生存有关. 进入转移灶后的癌细胞根据其侵袭和转移的需要, 其迁移能力又随之增加. Cajot et al 研究发现从人类大肠腺癌中分离培养的肝转移癌细胞, 其移动相关蛋白(MRP/CD9)在肝转移灶中的表达较原发灶中下降, 原发灶的癌细胞的迁移潜能显著高于转移灶的癌细胞[15]. 这一实验结果支持了我们的上述推测.

总之, paxillin作为一种调节焦点黏附蛋白, 在胃癌的分化、浸润和转移中其着重要作用.

备注

$[Footnotes]

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