胃癌 Open Access
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世界华人消化杂志. 2003-01-15; 11(1): 33-35
在线出版日期: 2003-01-15. doi: 10.11569/wcjd.v11.i1.33
胃癌组织中一氧化氮合酶的表达与血管形成的机制
陶文惠, 邓长生, 朱尤庆
陶文惠, 邓长生, 朱尤庆, 武汉大学中南医院消化内科 湖北省武汉市 430071
陶文惠, 女, 1970-12-21生, 湖北省武汉市人, 汉族.1993年湖北医科大学本科毕业, 2002年武汉大学医学院硕士研究生毕业, 主治医师. 主要从事消化系统疾病的临床及基础研究.
通讯作者: 陶文惠, 430071, 湖北省武汉市东湖路169号, 武汉大学中南医院消化内科. yushutaozi@sina.com
电话: 027-88017539 传真: 027-88017539
收稿日期: 2002-07-12
修回日期: 2002-07-15
接受日期: 2002-07-25
在线出版日期: 2003-01-15

目的: 研究诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase, iNOS)在人胃癌组织中的表达及其与胃癌微血管形成的关系, 以及和淋巴结转移的关系.

方法: 采用免疫组化SP法检测50例原发性胃癌中iNOS的表达, 同时检测微血管密度(microvessel density, MVD, 以抗CD34标记).

结果: iNOS阳性表达率为70%, 在淋巴结阴性组和阳性组分别为54.2%和84.6%, 两组间的差异有统计学意义(P<0.01); 在iNOS阴性表达组MVD均值为11.8±5.9, 在iNOS阳性表达(+)、(++)、(+++)组中MVD均值分别为18.7±6.3, 24.5±5.6, 30.1±9.4, iNOS阴性组和阳性组MVD均值差异有显著统计学意义(P<0.01).

结论: iNOS在胃癌组织中有高表达(70%), 与癌瘤微血管形成, 淋巴结转移有关系.

关键词: N/A
引文著录: 陶文惠, 邓长生, 朱尤庆. 胃癌组织中一氧化氮合酶的表达与血管形成的机制. 世界华人消化杂志 2003; 11(1): 33-35
Expression of inducible nitric oxide synthase and angiogenesis in gastric cancer
Wen-Hui Tao, Chang-Sheng Deng, You-Qing Zhu
Wen-Hui Tao, Chang-Sheng Deng, You-Qing Zhu, Department of Gastroenterology, Zhongnan Hospital, Wuhan University, Wuhan 430071, Hubei Province, China
Correspondence to: Wen-Hui Tao, Department of Gastroenterology, Zhongnan Hospital, Wuhan University, Wuhan 430071, Hubei Province, China. yushutaozi@sina.com
Received: July 12, 2002
Revised: July 15, 2002
Accepted: July 25, 2002
Published online: January 15, 2003

AIM: To investigate the expression of inducible NOS (iNOS) in human gastric cancer and its relationship with the angiogenesis in gastric cancer and lymphocyte metastasis.

METHODS: The expression of iNOS in 50 patients with gastric cancer was studied by immunohistochemical SP method with anti-iNOS. Microvessel density (MVD) of human gastric cancer was also determined with anti-CD34 as the labels.

RESULTS: The expression rate of iNOS in 50 cases was 70%, and the rates of node negative and node positive in gastric cancer were 54.2% and 84.6%, respectively, with significant difference (P < 0.01). There was a significant difference of MVD (P < 0.01) among groups with different expression of iNOS.

CONCLUSION: The expression rate of iNOS in human gastric cancer is high, and it is closely related to the carcinoangiogenesis and metastasis.

Key Words: N/A
0 引言

一氧化氮(nitric oxide, NO)是生物体内信息传递的重要调节因子, 并与许多疾病的发生发展有密切的关系[1-10]. 在体内, L-精氨酸和分子氧在一氧化氮合酶(nitric oxide synthase, NOS)的催化下生成L-胍氨酸和NO. NO作为一种递质, 在形成有致癌作用的亚硝酸盐和DNA损伤的基因突变方面具有重要作用. NOS作为NO合成的关键限速酶, 其表达直接影响NO的生成, NOS分为结构型NOS和诱导型NOS. Maeda和Akaike最近指出, 大多数实验性癌瘤组织均可见iNOS的升高, 产生的NO可增加血管通透性, 加速癌瘤组织营养供应而促进其快速生长[11]. 为此, 我们用免疫组化技术检测人胃癌组织中iNOS和血管密度的标记物抗CD34, 探讨iNOS与胃癌血管形成之间的关系.

1 材料和方法
1.1 材料

武汉大学中南医院1999-2001年住院的胃癌患者50例, 均经病理证实, 年龄19-64(平均54.6)岁, 有淋巴结转移者26例. iNOS, CD34, SP试剂盒均购自北京中山试剂公司.

1.2 方法

所有标本均经40 g/L甲醛固定, 石蜡包埋, 5 μm厚度连续切片各3片, 脱蜡至水, PBS 缓冲液漂洗3 min×2; 组织抗原修复15 min(用pH6 0.01mol柠檬酸缓冲液), PBS漂洗3 min×2; 过氧化酶阻断剂孵育10 min, PBS漂洗3 min×3; 非免疫性动物血清孵育10 min, 弃液, 滴加一抗, 室温下60 min; PBS漂洗3 min×3; 生物素标记二抗孵育10 min; PBS漂洗3 min×3; 链亲和素一氧化物酶溶液孵育10 min; PBS漂洗3 min×3; DAB显色; 苏木素浅染, 脱水, 封片, 镜下观察. iNOS染色的阳性信号为胞质和胞膜上出现棕黄色颗粒. 综合染色强度和阳性细胞数量进行分级, 按着色程度分为: 基本未着色、染色与背景相似者为0分; 着色浅、略高于背景者为1分; 中度着色、明显高于背景者为2分; 强染、着色深者为3分. 阳性细胞<10%为0分, 25%-50%为1分, 51%-75%为2分,>75%为3分. 两项相加后分4级: 0-1分为(-), 2分为(＋, 图1), 3-4分为(＋＋, 图2), 5分以上为(+++, 图3). 血管密度计数(MVD)参照Weidner法, 先在低倍镜下观察全片, 寻找"热点"(即新生血管最密集区), 然后在高倍镜下(×200倍, 图4)以任一棕色内皮细胞或细胞丛作为一个血管, 只要结构不相连, 其分支结构也作为一个血管计数. 记录5个视野内的微血管数, 取其平均数作为该病例的MVD.

图1
图1 胃癌组织中iNOS(+)表达(×400).
图2
图2 胃癌组织中iNOS(++)表达(×400).
图3
图3 胃癌组织中iNOS(+++)表达(×400).
图4
图4 胃癌组织中MVD(CD34标记)(×200).

统计学处理 胃癌中淋巴结阴性与阳性组间iNOS表达的比较用秩和检验, 淋巴结阴性与阳性组间MVD表达的比较用t检验, 各iNOS表达组间MVD的比较用F检验. 所有数据均用SPSS软件进行统计分析.

2 结果
2.1 胃癌中的iNOS的表达

胃癌iNOS阳性表达35例, 其中(＋)12例,(++)16例,(+++) 7例, 阳性率为70%. 无淋巴结转移组24例,(+) 6 例,(++) 5例,(+++) 2例, 阳性表达率为54.2%. 有淋巴结转移组 26 例,(+)6例,(++)11例,(+++)5例, 阳性表达率为84.6%, 经t检验, 两组间差异有统计学意义(P<0.05).

2.2 胃癌中的MVD计数

最高值为42, 最低值为6, 平均值为20.2±9.8. 有淋巴结转移26例的平均MVD为27.4±6.5, 无淋巴结转移24例的平均MVD为15.3±4.7, 经t检验两组间差异有统计学意义(P<0.01).

2.3 胃癌中的iNOS表达与微血管密度(MVD)的关系

在iNOS表达(-)-(+++)组中MVD平均值分别为11.8±5.9, 18.7±6.3, 24.5±5.6, 30.1±9.4, 经方差分析, 各组间的差异有统计学意义(P<0.05).

3 讨论

内源性NO由NOS催化L-精氨酸末端胍基中的一个氮原子氧化而生成, 是一种活性很强的无机自由基气体, 其化学性质不稳定, 体内半衰期仅3-5 s, 难以直接测定. 而NOS是NO产生的关键限速酶, 故可通过检测NOS的表达间接反应NO在体内的含量. 在体内, 根据存在的部位及作用机制, NOS可分为结构型NOS(constitutive NOS, cNOS)和诱导型NOS(inducible NO synthase, iNOS)二类[12]. cNOS 主要存在于神经细胞和内皮细胞中, 合成及释放的NO量少, 而iNOS存在于几乎所有组织的细胞中, 以巨噬细胞和血管平滑肌细胞内含量最多, 能持续大量释放NO. 多项研究表明, 慢性炎症中NOS过度表达可产生致突变的基因毒作用, 巨噬细胞表达iNOS可使DNA脱氨基, 诱导NO产生的淋巴细胞, 也可引起各种DNA病变[13]. 近年来研究表明iNOS与癌瘤关系密切[14-24]. 而且在胃癌组织中表达明显高于正常组织, 在胃癌发展中起重要作用[25]. 我们的研究也显示iNOS在胃癌组织中有高表达(70%).

癌瘤的生长和转移依赖于新生血管形成, 癌瘤内微血管密度与其侵袭性有关[26-28]. NO作为癌瘤细胞信号转导途径中重要的信使分子, 调节与细胞增生相关基因的表达, 增加癌瘤血供和血管形成, 促进其生长、侵袭、转移. Jenkins et al[29]将转染iNOS基因的结肠腺癌DLD-1细胞接种裸鼠皮下, 发现癌瘤生长速度快于野生型及转染空白质粒DLD-1细胞, 而且瘤体中有大量新生血管形成, 分泌NO的DLD-1细胞形成的癌瘤侵袭性强. Gallo et al[30]将高NOS表达的癌瘤细胞移植入兔角膜中有大量新生血管形成, 用L-NAME(NOS抑制剂)处理时血管形成明显减少. 在我们的研究中, 胃癌组织中iNOS的表达及MVD均值与淋巴结转移有密切关系. 而且, iNOS的表达程度不同, MVD值也不同, 随着iNOS表达的逐步增强MVD均值也逐渐增高, 淋巴结转移组的iNOS阳性率、MVD均值均高于无淋巴结转移组, 提示iNOS表达与胃癌血管形成及淋巴转移有相关性. 癌瘤血管壁结构与正常血管不同, 其通透性的增加是通过血管内皮生长因子(VEGF)促进血管通透性的, 而且在NO作用下VEGF增加血管通透性的作用被增强, NO还可以通过与缓激肽、TNF-a、IL-2等相互作用增加癌瘤血管通透性. NO通过增加血管通透性不但为癌瘤细胞提供了营养物质和O2, 而且通过血管内物质外渗, 促进了血管内皮细胞的增生、移行及癌瘤细胞的转移.

血管的形成在癌瘤的形成与发展中起重要作用, 我们的研究表明胃癌组织中iNOS表达与微血管密度及淋巴结转移有相关性, 利用iNOS抑制剂作为抗癌瘤血管形成的药物, 为肿瘤治疗提供了一条新思路.

编辑: N/A

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