P16蛋白与C-erbB-2在胰腺癌组织中表达意义

摘要

目的: 分析胰腺癌组织中C-erbB-2、P16蛋白表达的临床意义, 探讨诊治胰腺癌的有效方法.

方法: 40例胰腺癌石蜡包埋标本连续5 mm切片, HE染色确定肿瘤分化程度, 应用S-P法进行免疫组化染色, PBS代替一抗做阴性对照.

结果: C-erbB-2在胰腺癌组织中的阳性率为47.5%(19/40). 在高、中、低分化肿瘤中阳性率分别为38.89%, 50.00%和60.00%. 经检验无显著性差异(P>0.05), 但各级阳性表达率呈逐渐增高趋势. P16蛋白在胰腺癌组织中的缺失率为55%, 在高、中、低分化肿瘤中缺失率分别为27.78%、66.67%和90.00%, 经检验有非常显著性差异(P<0.01). P16蛋白和C-erbB-2蛋白的表达具有负相关性(P<0.05).

结论: 检测胰腺癌组织中P16蛋白及C-erbB-2蛋白的表达可作为胰腺癌诊断的分子生物学手段, C-erbB-2蛋白的表达与肿瘤的恶性度有关; P16蛋白的表达可反映胰腺癌的恶性度, 且同一肿瘤有多基因表达.

关键词: N/A

N/A

N/A

Correspondence to: N/A

Received: October 8, 2002
Revised: November 1, 2002
Accepted: December 8, 2002
Published online: January 15, 2003

Abstract

N/A

Key Words: N/A

0 引言

胰腺癌是消化系统恶性肿瘤中较难早期诊断的癌肿, 预后较差. 近年来本症发病率有增高倾向. 应用免疫组化方法分析胰腺癌组织中P16蛋白, C-erbB-2表达, 探讨其临床意义及应用, 指导临床治疗及对于预后的估计, 提高胰腺癌诊断的准确性, 改善本症存活率有着重要意义.

1 材料和方法

1.1 材料

收集我院外科1997-1999年手术切除并经病理证实为胰腺癌的标本40例, 男29例, 女11例, 年龄24-72岁, 平均年龄(57.33±11.98)岁. HE染色确定其分化程度, 其中高分化18例, 中分化12例和低分化10例.

1.2 方法

采用S-P法, 每例标本切片3张, 其中2张列入实验组(加单抗C-erbB-2和P16多抗), 另1张列入空白对照组(PBS代替一抗, 余步骤同实验组). 抗P21单克隆抗体、兔抗P16多克隆抗体和鼠抗C-erbB-2多克隆抗体均为Santa Cruz公司的产品, 工作浓度分别为1: 70, 1: 50和1: 100. S-P试剂盒(Kit-9302)为Maxin公司产品.

1.3 结果判断

染色阳性标记为棕黄色. 染色程度按以下标准划分: 每张切片分别观察10个高倍视野, 每个高倍视野计数100个肿瘤细胞内的免疫染色阳性细胞数, 计算出每张切片的阳性细胞百分数, 按阳性细胞百分数分为4个等级, 低于1%为阴性(-), 1%-10%为(+), 11%-50%为(++), 51%以上为(+++).

统计学处理 采用x²检验、秩和检验.

2 结果

2.1 C-erbB-2和P16蛋白的表达

C-erbB-2蛋白的表达位于胰腺癌细胞的细胞质和胞膜, 呈灶状和弥漫分布; P16蛋白的表达位于胰腺癌细胞质内, 呈弥漫性或颗粒性分布, 偶见细胞核内着色. C-erbB-2、P16蛋白在癌组织中的阳性率分别为47.5%(19/40)和45.0%(18/40).

2.2 癌基因蛋白的表达与病理组织学分级的关系

胰腺癌组织中C-erbB-2蛋白在高、中、低分化肿瘤中阳性率经c2检验无显著性差异(P>0.05), 但各级阳性表达率呈逐渐增高趋势(表1). 40例胰腺癌中有22例P16蛋白表达缺失, 将高、中、低分化肿瘤中的P16蛋白缺失率比较, 有非常显著性差异(秩和检验, P<0.01, 表2).

表1 胰腺癌中C-erbB-2的表达与病理分级的关系.

病理分级	C-erbB-2的表达					阳性率(%)
	n	-	＋	++	+++
高分化	18	11	2	3	2	38.89
中分化	12	6	3	1	2	50.00
低分化	10	4	2	1	3	60.00

表2 胰腺癌中P16的表达与病理分级的关系.

病理分级	C-erbB-2的表达					阳性率(%)
	n	-	＋	++	+++
高分化	18	5	5	6	2	27.78
中分化	12	8	2	1	1	66.67
低分化	10	9	1	0	0	90.00

2.3胰腺癌组织中P16蛋白与C-erbB-2表达的关系

P16蛋白与C-erbB-2表达呈负相关性(P<0.05), 说明同一肿瘤有多基因的表达.

3 讨论

癌基因的活化与表达是肿瘤发生与发展中主要的病理基础, 肿瘤的发生是多病因参与的多阶段过程, 各种肿瘤应有1个癌基因谱的参与, 不同肿瘤有所差异. 目前发现的细胞癌基因都是单拷贝结构基因, 都有编码产物, 细胞癌基因通过其编码产物引起细胞增生. 胰腺癌的发生、发展与原癌基因、抑癌基因的异常有关, 本研究检测胰腺癌组织中C-erbB-2、P16蛋白的表达, 证实了肿瘤的发生是多基因表达的癌基因谱的概念.

C-erbB-2癌基因又称为neu或HER-2, 编码分子量为185 Ku的穿膜蛋白, 与表皮生长因子同源, 该蛋白可抑制酪氨酸激酶的活性. C-erbB-2的激活一般是通过基因扩增实现的, 可见于多种肿瘤, 其表达部位位于肿瘤细胞或非肿瘤细胞胞质和胞膜上. 也有人认为P185蛋白表达以细胞膜型为主, 尤其在乳腺肿瘤、胰腺癌及肺癌. 根据肿瘤部位不同, P185阳性表达率差异较大, 胰腺癌为47%. 几次大规模的实验均表明其过量表达与肿瘤的发生、分化程度和核分级密切相关[1]. 本结果阳性率为47.5%. C-erbB-2的表达与病理分级无关, 但表达率随病理分级逐级提高而有明显增高趋势, 提示与肿瘤的恶性度有关.

P16蛋白由P16基因编码的16KD蛋白分子, P16基因是近年发现的一种肿瘤抑制基因, 又称MTS1, INK4, CDK4, CDK2基因. P16蛋白的主要作用是抑制依赖细胞激酶(cyclin-dependent kinase CDK)的活性. 细胞进入增生周期, 有赖于CDK的活性, 而CDK必须与细胞周期蛋白(cyclin)结合形成cyclin复合体后才能被活化, 后者使Rb蛋白产物P110Rb蛋白磷酸化, 从而促进细胞进入增生周期的G1-S期. P16基因对细胞的生长起着十分重要的负调节作用, 防止细胞的生长失控[2-4]. 当MTS1基因缺失或突变而不能正常表达时, P16蛋白就不能竞争结合CDK4阻止细胞进入有丝分裂, 会增加周期蛋白D与CDK4的结合而增加CDK4的活性, 促进细胞的有丝分裂, 从而使细胞生长失控, 导致进一步癌变[5,6]. 有报道胰腺癌P16蛋白的表达与胰腺癌的组织学分级无显著关系, 但与胰腺癌有无淋巴结转移关系密切(P<0.01), 提示P16蛋白可能是预测胰腺癌患者预后的一个重要指标[1]. 也有报道癌组织中的P16基因变异与临床分期密切相关, 提示P16基因在原发性胰腺癌的发生、发展过程中发挥着非常重要的作用[7]. 本研究P16蛋白的缺失率为55.0%, 且在不同分化程度的肿瘤中缺失率有明显差异, 肿瘤分化程度越低, 其缺失率越高, P16蛋白的表达可反映肿瘤的恶性度, 其可以与病理诊断同时进行, 从而提供一种辅助诊断的方法, 并且为估计患者的预后提供帮助. 借助于P16基因及其产物的检测, 可判断胰腺癌发展及评估其预后. P16靶基因治疗可能是治疗原发性胰腺癌的一条有效途径[8,9]. P16蛋白和C-erbB-2蛋白之间表达存在的负相关性, 说明胰腺癌的发生、发展与P16和C-erbB-2基因均有关系.

备注

编辑: N/A

参考文献

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