抗TNFα单链抗体复制缺陷型腺病毒载体的构建及表达

图1 DNΑ凝胶电泳图显示PCR结果. 泳道1-2: TNFα-scFv重组片段PCR产物; 3: Marker DL5000(从上至下分别5000、3000、2000、1500、1000、750、500、250、100 bp). TNFα: 肿瘤坏死因子α.

图2 穿梭载体pDONR221-TNFα-scFv的菌落PCR鉴定. 泳道1: Marker DL5000(从上至下分别为5000、3000、 2000、1500、1000、750、500、250、100 bp); 2: 阳性对照(以PUC57-Amp为模板); 3、5: 阴性克隆PCR扩增结果; 4: 阳性克隆PCR扩增结果. TNFα: 肿瘤坏死因子α.

图3 pΑd-TNFα-scFv质粒的PacⅠ酶切. 1: Marker 15000(从上到下依次为15000、10000、 7500、5000、2500、1000、250 bp); 2: PacⅠ酶切的pAd-TNFα-scFv质粒; 3: PacⅠ酶切回收后的pAd-TNFα-scFv质粒. TNFα: 肿瘤坏死因子α.

图4 pΑd-TNFα-scFv在293细胞中的包装(×100). A: 转染前293细胞; B: pΑd-TNFα-scFv在293细胞中包装转染7 d. TNFα: 肿瘤坏死因子α.

图5 Western blot检测重组腺病毒转染的293A细胞中TNFα-scFv的表达. 1: 重组腺病毒转染293细胞培养上清; 2: 重组腺病毒转染293细胞培养上清(浓缩); 3: 空白蛋白对照; 4: 重组腺病毒转染293细胞蛋白提取物. TNFα: 肿瘤坏死因子α.