基础研究
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世界华人消化杂志. 2021-07-08; 29(13): 690-700
Published online 2021-07-08. doi: 10.11569/wcjd.v29.i13.690
LINC00963通过miR-146a-5p/NFE2L1轴调控胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制研究
徐万苏, 柯飞, 许怡, 郑艺
徐万苏, 衢州市人民医院肿瘤放疗科 浙江省衢州市 324000
徐万苏, 主治医师, 研究方向为肿瘤学.
柯飞, 衢州市人民医院病理科 浙江省衢州市 324000
许怡, 郑艺, 衢州市人民医院消毒供应中心 浙江省衢州市 324000
作者贡献分布: 本文由徐万苏, 柯飞, 许怡, 郑艺统计并撰写; 徐万苏审阅.
通讯作者: 徐万苏, 本科, 主治医师, 324000, 浙江省衢州市柯城区钟楼底2号衢州市人民医院肿瘤放疗科. xws121987@163.com
收稿日期: 2021-04-06
修回日期: 2021-05-07
接受日期: 2021-05-25
在线出版日期: 2021-07-08
文章亮点
实验背景

胃癌是全球常见癌症, 死亡率高, 但胃癌发生、进展的潜在机制尚未阐明, 已有报道显示lncRNA表达异常可调控胃癌细胞恶性生物学行为, 但仍有部分lncRNA在胃癌进展中作用机制尚未可知.

实验动机

LINC00963在胃癌中表达上调, 但LINC00963在胃癌进展中的作用机制并不清楚. 既往研究证实LINC00963在肿瘤进展中具有致癌作用. 因此, 探讨LINC00963在胃癌进展中的作用和机制对胃癌诊断和治疗意义重大.

实验目标

LINC00963低表达通过调控miR-146a-5p/NFE2L1轴可抑制胃癌细胞增殖、迁移和侵袭, 为胃癌治疗提供潜在靶点.

实验方法

RT-qPCR和western blot检测胃癌组织、细胞系中LINC00963、miR-146a-5p和NFE2L1的表达. 将si-LINC00963、si-NFE2L1、miR-146a-5p mimics分别转染到胃癌细胞SNU-1中, CCK-8法检测细胞增殖; Transwell实验检测细胞迁移和侵袭; 双荧光素酶报告实验验证LINC00963与miR-146a-5p、miR-146a-5p与NFE2L1的靶向关系. 将si-LINC00963和pcDNA-NFE2L1共转染到SNU-1细胞中, 采用CCK-8、Transwell实验检测细胞增殖、迁移和侵袭能力. Western blot检测增殖、迁移和侵袭相关蛋白表达.

实验结果

LINC00963、NFE2L1在胃癌组织、细胞系中表达上调, miR-146a-5p表达下调. 低表达LINC00963或低表达NFE2L1或高表达miR-146a-5p均可抑制SNU-1细胞增殖、迁移和侵袭, 下调CyclinD1、MMP2、MMP9蛋白表达. 双荧光素酶报告实验证实LINC00963可靶向结合miR-146a-5p, miR-146a-5p可靶向结合NFE2L1. LINC00963可负向调控miR-146a-5p表达, miR-146a-5p可负向调控NFE2L1表达. 高表达NFE2L1可以逆转LINC00963低表达对SNU-1细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用.

实验结论

胃癌中LINC00963表达增加, LINC00963低表达通过调控miR-146a-5p/NFE2L1轴能够减弱胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力.

展望前景

LINC00963下游是否存在其他miRNA、miR-146a-5p下游是否存在其他靶点仍需进一步确认, 还需体内移植瘤实验验证LINC00963的致癌作用, LINC00963/miR-146a-5p/NFE2L1轴可能作为胃癌治疗的靶标基因.