基础研究
Copyright ©The Author(s) 2020. Published by Baishideng Publishing Group Inc. All rights reserved.
世界华人消化杂志. 2020-01-28; 28(2): 50-57
Published online 2020-01-28. doi: 10.11569/wcjd.v28.i2.50
ARHI基因对胃癌细胞株MKN28增殖、侵袭、凋亡的影响及其机制研究
张晓威
张晓威, 锦州医科大学附属第一医院 辽宁省锦州市 121000
张晓威, 住院医师, 研究方向为胃肠道肿瘤的防治及其发病机制的研究.
基金项目: 辽宁省教育厅2019年科学研究经费项目, No. 32027.
作者贡献分布: 此课题由张晓威设计; 研究过程由张晓威操作完成; 数据分析由张晓威完成; 本论文写作由张晓威完成.
通讯作者: 张晓威, 住院医师, 121000, 辽宁省锦州市古塔区人民街五段2号, 锦州医科大学附属第一医院, 锦州医科大学附属第一医院. 798328818@qq.com
收稿日期: 2019-12-11
修回日期: 2019-12-20
接受日期: 2020-01-07
在线出版日期: 2020-01-28
Abstract
背景

ARHI已经被证实表达缺失与肿瘤的发生与进展相关. 但是, 目前尚不清楚ARHI基因对胃癌(gastric cancer, GC)是否具有增殖抑制作用, 此次实验以GC细胞株MKN28为例, 构建高表达pcDNA3.1-ARHI质粒, 通过细胞转染技术转染MKN28细胞株, 进一步研究ARHI基因对GC细胞增殖、侵袭及凋亡的影响.

目的

以GC细胞MKN28为例, 研究ARHI基因对GC细胞增殖、侵袭及凋亡的影响, 并探讨其机制.

方法

构建pcDNA3.1-ARHI质粒, 通过细胞转染技术转染MKN28细胞株, 取处于对数期的空白对照组、阴性对照Mock组及ARHI高表达克隆株clone4细胞进行实验, 以MTT比色法检测细胞增殖; 细胞划痕检测细胞迁移能力; Transwell法检测细胞侵袭能力; 流式细胞术检测细胞凋亡率; Western blot检测相关蛋白表达.

结果

与正常MKN28细胞48 h增殖率1.257%±0.006%相比, Mock组与ARHI高表达克隆株48h细胞增殖率分别为1.163%±0.003%(P>0.05), 0.826%±0.005%(P<0.05); 与正常MKN28细胞48 h迁移率(19.918%±0.233%)相比, Mock组与ARHI高表达克隆株48 h细胞迁移率分别为18.295%±0.534%(P>0.05), 4.299%±1.572%(P<0.05); 与正常MKN28细胞48 h侵袭率(234±3.61)相比, Mock组与ARHI高表达克隆株48 h细胞侵袭率分别为235±4.51(P>0.05), 93.3±2.08(P<0.05); 与正常MKN28细胞48 h总凋亡率(3.513%±0.015%)相比, Mock组与ARHI高表达克隆株48 h细胞总凋亡率分别为3.597%±0.25%(P>0.05), 14.133%±0.032%(P<0.05); Western blot检测各组细胞内蛋白结果显示: 与MKN28细胞相比, Mock组中ARHI蛋白为1.037±0.003(P>0.05), 血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)蛋白为1.026±0.008(P>0.05), B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2, Bcl-2)蛋白为1.014±0.010(P>0.05), 蛋白激酶B(protein kinase B, AKT)蛋白为1.001±0.005(P>0.05), 磷酸化AKT(p-AKT)蛋白为0.977±0.003(P>0.05); 高表达克隆株clone4中ARHI蛋白为2.088±0.007(P<0.05), VEGF蛋白为0.456±0.004(P<0.05), Bcl-2蛋白为0.468±0.005(P<0.05), AKT蛋白为0.969±0.005(P>0.05), p-AKT蛋白为0.502±0.001(P<0.05).

结论

ARHI基因过表达可抑制GC细胞MKN28的增殖, 促进细胞凋亡, 这可能与ARHI基因高表达后导致磷脂酰肌醇3-激酶/AKT通路中的VEGF、p-AKT蛋白表达降低有关.

Keywords: ARHI基因; 胃癌; 增殖; 凋亡

核心提要: 本实验创新性的构建pcDNA3.1-ARHI质粒, 通过细胞转染技术转染MKN28细胞株,研究结果提示: ARHI基因过表达可抑制胃癌细胞MKN28的增殖, 促进细胞凋亡, 这可能与ARHI基因高表达后导致磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B通路中的血管内皮生长因子、磷酸化蛋白激酶B蛋白表达降低有关. 这将为临床治疗提供给新的基因靶点.