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血清饥饿对结肠癌HCT116细胞外泌体分泌的影响
高佳佳, 李薇, 鞠强, 周兰萍, 赵晓航, 北京协和医学院中国医学科学院肿瘤医院 分子肿瘤学国家重点实验室 北京市 100021
高佳佳, 在读博士, 主要从事消化肿瘤癌变机制的研究.
基金项目: 国家自然科学基金资助项目, Nos. 81572365, 81372591; 国家高技术发展计划("863"计划)基金资助项目, No. 2012AA020206.
作者贡献分布: 本课题由赵晓航设计; 研究过程由高佳佳、周兰萍及李薇操作完成; 数据分析由高佳佳与鞠强完成; 论文起草由高佳佳与李薇完成; 文章修改与审阅由赵晓航完成.
通讯作者: 赵晓航, 教授, 100021, 北京市朝阳区潘家园南里17号, 北京协和医学院中国医学科学院肿瘤医院, 分子肿瘤学国家重点实验室. zhaoxh@cicams.ac.cn
电话: 010-67709015 传真: 010-87778360
收稿日期: 2015-11-20
修回日期: 2015-12-07
接受日期: 2015-12-14
在线出版日期: 2016-02-08
修回日期: 2015-12-07
接受日期: 2015-12-14
在线出版日期: 2016-02-08
Abstract
目的: 本研究尝试使用添加无外泌体血清(Exosome-depleted FBS)的培养基培养细胞并提取外泌体, 比较无外泌体血清和传统的无血清两种不同的培养条件对结肠癌HCT116细胞外泌体分泌的影响, 旨在优化外泌体提取条件, 使之有利于后续功能研究.
方法: 采用提取前24 h无血清和添加无外泌体血清培养基培养结肠癌细胞, 普通光学显微镜下观察两种培养条件下细胞的生长和形态, 用超速离心法分步提取分泌到细胞培养上清中的外泌体, 透射电子显微镜下观察外泌体的形态, 蛋白免疫印迹法分析外泌体标志蛋白, 以及纳米颗粒追踪计数分析外泌体大小和含量.
结果: 与无血清培养条件相比, 添加无外泌体血清培养的HCT116细胞生长状态良好, 细胞无明显死亡现象. 两种培养条件分泌的外泌体形态相近, 均呈圆形或椭圆形, 由脂质双分子层包裹的小囊泡, 直径为40-100 nm. 无外泌体血清培养条件分泌的外泌体大约是无血清培养的6倍, 二种培养条件下提取的外泌体直径均为90 nm左右, 与电镜结果一致. 两种培养条件提取的外泌体中均检测到HSP70和CD63外泌体标志蛋白.
结论: 添加无外泌体血清培养HCT116细胞分泌的外泌体与无血清培养相比无明显差异, 但添加无外泌体血清培养的细胞状态比无血清培养的细胞状态好, 外泌体的分泌可能更接近生理条件下的生长环境, 分泌的外泌体数量更多, 因此无外泌体血清培养条件较无血清培养更适合结肠癌来源外泌体的提取和研究.
Keywords: 外泌体; 结肠癌; 血清饥饿; 无外泌体血清
核心提示: 细胞经去除外泌体血清培养较血清饥饿条件细胞外泌体分泌量增加, 其结构和特征不变, 提示无外泌体血清培养条件更适合结肠癌来源外泌体的提取和研究.