研究快报
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世界华人消化杂志. 2016-10-08; 24(28): 3985-3990
Published online 2016-10-08. doi: 10.11569/wcjd.v24.i28.3985
DAB2IP启动子荧光素酶报告基因载体的构建及其应用
王舰梅, 周铁军, 张熙曦, 鲁梦婕, 刘勇
王舰梅, 周铁军, 鲁梦婕, 刘勇, 西南医科大学附属医院病理科 四川省泸州市 646000
张熙曦, 西南医科大学附属医院妇产科 四川省泸州市 646000
作者贡献分布: 此课题由王舰梅与刘勇设计; 研究过程由王舰梅、周铁军、张熙曦及刘勇共同完成; 数据分析由鲁梦婕完成; 本论文终稿由王舰梅与刘勇完成.
基金项目: 四川省卫生和计划生育委员会科研基金资助项目, No. 150070; 泸州医学院科研基金资助项目, No. 2014QN-047; 泸州医学院附属医院课题基金资助项目.
通讯作者: 刘勇, 副教授, 646000, 四川省泸州市太平街25号, 西南医科大学附属医院病理科. ly060316@163.com
电话: 0830-3160996
收稿日期: 2016-05-28
修回日期: 2016-07-13
接受日期: 2016-07-19
在线出版日期: 2016-10-08
Abstract
目的

构建并鉴定DAB2IP启动子荧光素酶报告基因载体pGL3-Basic-DAB2IP-luc, 观察Snail在胃癌细胞中对DAB2IP表达调控.

方法

利用PCR法克隆出DAB2IP启动子序列(1000 bp), 构建pGL3-Basic-DAB2IP-luc载体并酶切并测序鉴定. 检测转染pEGFP-C1-Snail载体对pGL3-Basic-DAB2IP-luc双荧光素酶活性及对DAB2IP的表达水平的影响.

结果

荧光素酶报告系统结果显示Snail+pGL3-Basic-DAB2IP-luc组荧光活性明显低于pGL3-Basic-DAB2IP-luc组和空白组(P<0.01; P<0.01), 此外, pGL3-Basic-DAB2IP-luc组比空白组的荧光活性更低(P<0.01; P<0.01). 荧光定量PCR和Western blot结果显示, 转染pEGFP-C1-Snail下调DAB2IP的mRNA和蛋白水平.

结论

转录因子Snail抑制DAB2IP的转录和表达. 具有生物活性的pGL3-Basic-DAB2IP-luc的构建成功为研究DAB2IP在胃癌中转录调控机制提供了重要的研究工具.

Keywords: DAB2IP; Snail; 启动子; 胃癌

核心提要: DAB2IP是多个信号通路的重要分子开关, 参与细胞内信号调控. 通过构建DAB2IP启动子载体, 在胃癌细胞中验证转录因子Snail对DAB2IP的转录活性和表达水平的影响.