研究快报
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世界华人消化杂志. 2015-11-08; 23(31): 5017-5023
Published online 2015-11-08. doi: 10.11569/wcjd.v23.i31.5017
Claudin-7可诱导性条件性基因敲除小鼠模型的构建和鉴定
李腾雁, 王晓楠, 李文晶, 高宏, 丁磊
李腾雁, 王晓楠, 李文晶, 高宏, 丁磊, 首都医科大学附属北京世纪坛医院肿瘤中心 北京市 100038
李腾雁, 在读硕士, 主要从事大肠癌发生、发展、转移机制的研究.
基金项目: 国家自然科学基金面上资助项目, No. 81372585; 北京市教育委员会科技计划基金面上资助项目, No. KM201410025026; 2014年北京市留学人员科技活动择优资助优秀类项目.
作者贡献分布: 论文写作由李腾雁完成; 研究过程由王晓楠完成; 试剂由李文晶提供; 数据分析由高宏完成; 课题设计、论文修改与整理由丁磊完成.
通讯作者: 丁磊, 主任医师, 博士, 100038, 北京市海淀区羊坊店铁医路10号, 首都医科大学附属北京世纪坛医院肿瘤中心. dinglei1005@126.com
电话: 010-63926296
收稿日期: 2015-09-03
修回日期: 2015-09-26
接受日期: 2015-10-15
在线出版日期: 2015-11-08
Abstract

目的: 应用Cre-Loxp系统构建Claudin-7蛋白在肠道可诱导性条件性基因敲除小鼠模型, 并进行表型分析.

方法: 构建Claudin-7打靶载体, 通过电击法转染入小鼠胚胎干细胞(ES细胞), 用正负筛选法筛选阳性ES细胞并进行PCR鉴定和Southern鉴定, 利用显微注射把发生正确同源重组的ES细胞注射进C57BL/6N小鼠囊胚, 移入受体小鼠子宫以获得嵌合体小鼠. 将得到的嵌合体小鼠与C57BL/6N小鼠交配获得Claudin-7-flox小鼠, 该小鼠与Pvillin-CreERT2转基因小鼠杂交, 通过子代自交获得Claudin-7在肠道可诱导性条件性基因敲除(Cldn7fl/flVillin-CreERT2)的小鼠,他莫昔芬(tamoxifen)药物诱导肠道Claudin-7基因敲除, 对小鼠进行表型分析.

结果: 获得Claudin-7-flox小鼠及Claudin-7肠道可诱导性条件性基因敲除小鼠数只, Claudin-7肠道可诱导性条件性基因敲除小鼠出生时表型正常, 发育良好, 他莫昔芬(tamoxifen)药物应用后, 诱导了小鼠肠道上皮细胞Claudin-7基因表达的缺失. 小鼠出现脱水表现, 活泼度降低, 并出现死亡.

结论: 成功构建了Claudin-7肠道可诱导性条件性基因敲除小鼠模型, 利用他莫昔芬诱导肠道Claudin-7基因敲除, 初步构建了肠道炎症模型, 为进一步研究Claudin-7在肠道肿瘤中的作用奠定了基础.

Keywords: 紧密连接蛋白; Claudin-7; 诱导性条件性基因敲除; Cre/Loxp; 肿瘤

核心提示: 为研究Claudin-7基因在肠道肿瘤发生和发展中的分子生物学作用, 本研究设计基于同源重组理论, 利用ES细胞打靶以及显微注射技术, 构建了Claudin-7基因在肠道中可诱导条件性敲除的小鼠模型, 为体内研究Claudin-7的抑瘤功能奠定了坚实基础.