基础研究
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世界华人消化杂志. 2015-10-08; 23(28): 4490-4498
Published online 2015-10-08. doi: 10.11569/wcjd.v23.i28.4490
AFAP-1L2通过PI3K/Akt通路影响胰腺癌细胞增殖及凋亡
刘博, 戚诚, 刘学臣, 赵晓东
刘博, 戚诚, 赵晓东, 河北医科大学第二医院肿瘤外科 河北省石家庄市 050000
刘学臣, 河北医科大学第二医院消化内科 河北省石家庄市 050000
刘博, 主治医师, 主要从事消化系恶性肿瘤的基础与临床研究.
作者贡献分布: 刘博与戚诚对此文所作贡献均等; 此课题由刘博、刘学臣、戚诚及赵晓东设计; 研究过程由刘博、刘学臣及戚诚操作完成; 数据分析由刘博、刘学臣及赵晓东完成; 本论文写作由刘博与刘学臣完成.
通讯作者: 赵晓东, 教授, 050000, 河北省石家庄市和平西路215号, 河北医科大学第二医院肿瘤外科. larrygh@aliyun.com
电话: 0311-66003919
收稿日期: 2015-08-14
修回日期: 2015-09-03
接受日期: 2015-09-11
在线出版日期: 2015-10-08
Abstract

目的: 检测肌动蛋白丝相关蛋白1相似蛋白(actin filament-associated protein 1-like 2, AFAP-1L2)在不同分化程度胰腺癌细胞株中的表达, 并观察其对下游磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶(phosphatidylinositol 3 kinase/protein kinase B, PI3K/Akt)通路调控作用及对胰腺癌细胞的增殖、周期及凋亡的影响.

方法: 以Western blot及实时定量PCR检测(real-time quantitative PCR, qRT-PCR)法对不同分化程度胰腺癌细胞系PANC-1、MiaPaCa-2、Colo-357、BXPC-3、SW1990及CFPAC-1中AFAP-1L2表达进行检测; 构建靶向AFAP-1L2的干扰质粒siAFAP-1L2, 转染MiaPaCa-2细胞, 以Western blot及qRT-PCR法检测AFAP-1L2下调后PI3K/Akt通路蛋白及mRNA变化; 四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(methyl-thiazolyl-tetrazolium, MTT)法检测转染后MiaPaCa-2细胞增殖; 流式细胞术检测细胞周期及凋亡.

结果: Western blot及qRT-PCR法显示, AFAP-1L2蛋白及mRNA表达水平在低分化胰腺癌细胞系中表达水平高于中分化及高分化细胞系. siAFAP-1L2转染后磷脂酰肌醇3激酶α亚单位(PI3KCA)蛋白在siAFAP-1L2组的表达量明显低于AFAP-1L2组及小干扰RNA(small interfering RNA, siRNA) control组(F = 9.280, P = 0.0139), α蛋白激酶(α-Akt)在siAFAP-1L2细胞的表达量高于MOCK细胞及siRNA control细胞(F = 7.719, P = 0.0219), 磷酸化α蛋白激酶(α-pAkt)在siAFAP-1L2细胞的表达量低于MOCK细胞及siRNA control细胞(F = 5.507, P = 0.0439). PI3KCAmRNA在siAFAP-1L2组的表达量明显低于AFAP-1L2组及siRNA control组(F = 20.16, P = 0.0022), α-Akt mRNA在siAFAP-1L2细胞的表达量高于MOCK细胞及siRNA control细胞(F = 6.068, P = 0.0362), α-pAkt mRNA在siAFAP-1L2细胞的表达量低于MOCK细胞及siRNA control细胞(F = 10.33, P = 0.0114). MTT检测显示, 在48、72及96 h siAFAP-1L2干扰后MiaPaCa-2细胞增殖能力下降(F = 3.924, P<0.05; F = 6.812, P<0.01; F = 7.003, P<0.01). 流式细胞检测显示, siAFAP-1L2干扰后G1期细胞比例增高, G2及S期比例减少(F = 4.87, F = 5.26, F = 4.94, 均P<0.05), siAFAP-1L2干扰后MiaPaCa-2细胞凋亡率增高(F = 7.231, P<0.01).

结论: 在分化程度低的胰腺癌细胞中AFAP-1L2表达较高, AFAP-1L2通过PI3K/Akt通路影响胰腺癌细胞增殖、细胞周期及凋亡, 可作为胰腺癌治疗新的靶向候选基因.

Keywords: 细胞分化; 肌动蛋白丝相关蛋白1相似蛋白2; 胰腺癌; 增殖; 凋亡

核心提示: 本研究在分子生物学水平研究不同分化程度胰腺癌细胞系中肌动蛋白丝相关蛋白1相似蛋白(actin filament-associated protein 1-like 2, AFAP-1L2)表达, 并采用小干扰RNA(small interfering RNA, siRNA)干扰AFAP-1L2表达, 检测AFAP-1L2对下游磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶(phosphatidylinositol 3 kinase/protein kinase)通路的调控作用, 从而影响胰腺癌细胞增殖、细胞周期及凋亡, 探讨其机制.