研究快报
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世界华人消化杂志. 2015-06-18; 23(17): 2768-2773
Published online 2015-06-18. doi: 10.11569/wcjd.v23.i17.2768
FGF4基因慢病毒表达载体的构建、包装及鉴定
徐丽娟, 张云巍, 胡亚卓, 阎丽
徐丽娟, 张云巍, 阎丽, 中国人民解放军总医院南楼临床部消化内科 北京市 100853
胡亚卓, 中国人民解放军总医院老年医学研究所病理科 北京市 100853
徐丽娟, 在读硕士, 主要从事肝硬化干细胞移植治疗方面的研究.
基金项目: 国家自然科学基金资助项目, No. 30900669; 北京市科技新星计划基金资助项目, No. 2011117.
作者贡献分布: 此课题由阎丽设计; 研究过程由阎丽与徐丽娟操作完成; 研究所用试剂与分析工具由胡亚卓提供; 数据分析由张云巍完成; 本论文写作由徐丽娟完成.
通讯作者: 阎丽, 副教授, 副主任医师, 硕士生导师, 100853, 北京市海淀区复兴路28号, 中国人民解放军总医院南楼临床部消化内科. yanlifmu@126.com
电话: 010-66876226
收稿日期: 2015-04-03
修回日期: 2015-04-30
接受日期: 2015-05-19
在线出版日期: 2015-06-18
Abstract

目的: 构建成纤维细胞生长因子4(fibroblast growth factor 4, FGF4)基因慢病毒过表达载体并对其进行鉴定、包装.

方法: 采用BamH Ⅰ/Age Ⅰ酶酶切含目的基因FGF4的质粒, 将目的基因与酶切线性化的载体进行定向交换, 构建重组慢病毒表达载体pGC-FU-FGF4, 将其产物转化大肠杆菌感受态细胞. 筛选阳性克隆先进行菌落PCR鉴定, 再对PCR鉴定阳性的克隆进行测序分析, 将目的质粒感染293T细胞24 h后, 采用Real-time定量PCR测定包装的病毒滴度.

结果: PCR结果显示扩增的目的基因FGF4已成功插入pGC-FU载体. 阳性克隆测序结果显示与目的基因序列一致. 目的质粒转染后24 h, 293T细胞几乎100%表达绿色荧光, Real-time定量PCR法测定包装的病毒滴度为2×108 TU/mL.

结论: 本实验成功构建了FGF4慢病毒表达载体, 成功对慢病毒及进行了包装及病毒滴度测定.

Keywords: 慢病毒载体; 成纤维细胞生长因子4基因; 感受态细胞

核心提示: 成纤维细胞生长因子4(fibroblast growth factor 4, FGF4)在间充质干细胞成肝脏样细胞的诱导中具有重要作用, 为明确FGF4因子的具体作用机制, 本研究拟建立稳定的FGF4基因慢病毒体系, 为其具体的机制研究奠定基础.