CD4+CD29+ T细胞亚群与溃疡性结肠炎的相关性及黄芩苷的干预作用

Abstract

目的: 探讨溃疡性结肠炎(ulcerative colitis, UC)患者CD4⁺CD29⁺辅助性T细胞及其表面标志和相关细胞因子的表达, 并进一步探讨体外黄芩苷干预的作用.

方法: 选取33例UC患者, 30例腹泻型肠易激综合征(irritable bowel syndrome, IBS-D)组, 30例健康组, 应用流式细胞仪检测UC患者CD4⁺CD29⁺的表达, Q-PCR的检测其GATA-3、FOXP3、T-bet、RORC的表达, Western blot检测其核因子κB(nuclear factor-kappa B, NF-κB) p65和phospho-NF-κB p65、STAT4和phospho-STAT4、STAT6和phospho-STAT6的表达, 用ELISA法检测血清γ-干扰素(interferon γ, IFN-γ)、白介素(interleukin, IL)-4、IL-5、IL-6、IL-10、肿瘤生长因子β(tumor specific growth factor-β, TGF-β)的水平及体外黄芩苷干预的作用.

结果: UC患者外周血中CD4⁺CD29⁺ T细胞与健康对照组和IBS-D组相比, CD4⁺和CD4⁺CD29⁺明显增高, 差异有统计学意义(P<0.01); IFN-γ、IL-4、IL-5、IL-10和TGF-β1与IBS-D组和健康对照组均有不同程度的升高, IL-6较IBS-D组和健康对照组稍降低; 外周血单个核细胞RORC和FOXP3 mRNA与健康对照组和IBS-D组相比, RORC和FOXP3 mRNA明显增高, 差异有统计学意义(P<0.05); 外周血T细胞转录因子T-bet基因的表达水平明显高于健康对照组, GATA-3基因的表达低于健康对照组, T-bet/GATA-3的比值明显高于健康对照组(P<0.05); 40 μmol/L和20 μmol/L浓度黄芩苷的干预下CD4⁺CD29⁺较未干预前明显增高, 明显降低IFN-γ、IL-5、IL-6, 而升高IL-4和IL-10; RORC和FOXP3均明显下降, 可明显降低T-bet, 可稍降低GATA3, 使T-bet/GATA-3的比值较干预前降低; p-STAT4/STAT4较未干预前明显下降, p-STAT6/STAT6明显增高, p-NF-κB/NF-κB明显下降.

结论: 黄芩苷可能通过促CD4⁺CD29⁺增殖作用及多方面的免疫抑制调节免疫平衡而缓解溃疡性结肠的炎症反应, 为深入研究UC的发病机制及新药开发提供理论基础.

Keywords: 溃疡性结肠炎; 黄芩苷; CD4⁺CD29⁺; 细胞因子; 核因子κB

核心提示: 本研究通过检测外周血单个核细胞核因子κB(nuclear factor-kappa B, NF-κB)及磷酸化NF-κB在溃疡性结肠炎(ulcerative colitis)中的表达, 发现与健康对照组和腹泻型肠易激综合征(irritable bowel syndrome, IBS-D)组相比较, p-NF-κB明显增高, NF-κB明显下降, p-NF-κB/NF-κB明显增高, 差异有统计学意义(P<0.05). 体外黄芩苷干预, 40 μmol/L浓度干预下p-NF-κB/NF-κB下降, 差异有统计学意义(P<0.05). 从而说明黄芩苷可能抑制p-NF-κB/NF-κB, 调节免疫平衡而缓解溃疡性结肠的炎症反应. 我们同时通过ELISA检测血清中细胞因子, 发现γ-干扰素(interferon γ)、白介素-4(interleukin, IL-4)、IL-5、IL-10和肿瘤生长因子β(tumor specific growth factor-β)与炎症性肠病(inflammatory bowed disease)组和健康对照组均有不同程度的升高, IL-6较IBS-D组和健康对照组稍降低.