Published online 2014-07-18. doi: 10.11569/wcjd.v22.i20.2826
修回日期: 2014-04-28
接受日期: 2014-05-12
在线出版日期: 2014-07-18
目的: 探讨人肝癌细胞(MHCC-97H)和人胆管癌细胞(human bile duct carcinoma cell, RBE)中酪氨酸激酶受体c-Met前体(pro-Met)的N-糖基化修饰对c-Met功能的影响.
方法: 分别用N-糖基化抑制剂衣霉素、蛋白酶体抑制剂MG132、蛋白合成抑制剂放线菌酮及c-Met抑制剂PF-2341066处理MHCC-97H 细胞和RBE细胞, 采用Western blot、免疫荧光及激光共聚焦显微镜等方法分析pro-Met的N-糖基化修饰对c-Met功能的影响.
结果: MHCC-97H细胞和RBE细胞中磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidy linositol 3 kinase/Akt, PI3K/Akt)以及有丝分裂原活化蛋白激酶/细胞外信号调节激酶(mitogen-activated protein kinase/extracellular signal-regulated kinase, MEK/ERK)是c-Met下游信号通路. c-Met是一种N-糖基化修饰的蛋白分子. c-Met的N-糖基化修饰源于pro-Met的N-糖基化. 非糖基化pro-Met虽然能够发生磷酸化修饰, 但不能有效激活c-Met下游信号通路. c-Met的成熟和膜定位需要其糖基化修饰.
结论: c-Met的N-糖基化修饰是维持其功能所必需的.
核心提示: 该实验发现c-Met具有N-糖基化修饰而非O-糖基化修饰. c-Met的糖基化源于pro-Met的N-糖基化修饰, 抑制pro-Met的N-糖基化修饰导致pro-Met的磷酸化修饰. 此外, 由于未糖基化的pro-Met不能定位于细胞膜, 因而磷酸化的pro-Met不能有效激活c-Met下游的信号途径. c-Met的N-糖基化修饰是维持其功能所必需的.