基础研究
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世界华人消化杂志. 2014-07-18; 22(20): 2826-2838
Published online 2014-07-18. doi: 10.11569/wcjd.v22.i20.2826
pro-Met的N-糖基化修饰对c-Met功能的影响
段春燕, 陈绍坤, 张春燕, 冯春红, 刘友平, 夏先明, 余文静, 代荣阳, 李洪
段春燕, 陈绍坤, 张春燕, 刘友平, 余文静, 代荣阳, 李洪, 泸州医学院生物化学与分子生物学教研室 四川省泸州市 646000
冯春红, 夏先明, 代荣阳, 泸州医学院附属医院肝胆外科 四川省泸州市 646000
段春燕, 主要从事肝脏疾病的研究.
基金项目: 教育部新世纪优秀人才支持计划基金资助项目, No. NCET-11-1058; 四川省科技厅青年基金资助项目, No. 2013JQ0045; 四川省科技厅支撑计划基金资助项目, No. 2009SZ0117.
作者贡献分布: 段春燕与李洪对此文所作贡献均等; 此课题由段春燕与李洪设计; 研究过程由段春燕、陈绍坤、张春燕、冯春红、刘友平、夏先明、余文静及代荣阳操作完成; 数据分析由代荣阳完成; 本论文写作由段春燕完成.
通讯作者: 李洪, 教授, 646000, 四川省泸州市忠山路, 泸州医学院生物化学与分子生物学教研室. lihong7188@163.com
电话: 0830-3160673
收稿日期: 2014-01-07
修回日期: 2014-04-28
接受日期: 2014-05-12
在线出版日期: 2014-07-18
Abstract

目的: 探讨人肝癌细胞(MHCC-97H)和人胆管癌细胞(human bile duct carcinoma cell, RBE)中酪氨酸激酶受体c-Met前体(pro-Met)的N-糖基化修饰对c-Met功能的影响.

方法: 分别用N-糖基化抑制剂衣霉素、蛋白酶体抑制剂MG132、蛋白合成抑制剂放线菌酮及c-Met抑制剂PF-2341066处理MHCC-97H 细胞和RBE细胞, 采用Western blot、免疫荧光及激光共聚焦显微镜等方法分析pro-Met的N-糖基化修饰对c-Met功能的影响.

结果: MHCC-97H细胞和RBE细胞中磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidy linositol 3 kinase/Akt, PI3K/Akt)以及有丝分裂原活化蛋白激酶/细胞外信号调节激酶(mitogen-activated protein kinase/extracellular signal-regulated kinase, MEK/ERK)是c-Met下游信号通路. c-Met是一种N-糖基化修饰的蛋白分子. c-Met的N-糖基化修饰源于pro-Met的N-糖基化. 非糖基化pro-Met虽然能够发生磷酸化修饰, 但不能有效激活c-Met下游信号通路. c-Met的成熟和膜定位需要其糖基化修饰.

结论: c-Met的N-糖基化修饰是维持其功能所必需的.

Keywords: c-Met; pro-Met; N-糖基化; 磷酸化

核心提示: 该实验发现c-Met具有N-糖基化修饰而非O-糖基化修饰. c-Met的糖基化源于pro-Met的N-糖基化修饰, 抑制pro-Met的N-糖基化修饰导致pro-Met的磷酸化修饰. 此外, 由于未糖基化的pro-Met不能定位于细胞膜, 因而磷酸化的pro-Met不能有效激活c-Met下游的信号途径. c-Met的N-糖基化修饰是维持其功能所必需的.