基础研究
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世界华人消化杂志. 2014-06-08; 22(16): 2221-2228
Published online 2014-06-08. doi: 10.11569/wcjd.v22.i16.2221
下调GPC-3基因转录对肝癌细胞侵袭及血管新生的抑制作用
邰伯军, 姚敏, 王理, 钱琦, 时杨, 蔚丹丹, 陆少林, 姚登福
邰伯军, 南通大学附属医院感染性疾病科 江苏省南通市 226001
姚敏, 南通大学医学院免疫学教研室 江苏省南通市 226001
王理, 南通大学医学院医学信息学教研室 江苏省南通市 226001
钱琦, 蔚丹丹, 南通大学附属医院肿瘤科 江苏省南通市 226001
时杨, 陆少林, 姚登福, 南通大学附属医院临床医学研究中心 江苏省南通市 226001
邰伯军, 副主任医师, 主要从事肝癌的早期诊断与发病机制的研究.
基金项目: 国家国际科技合作专项基金资助项目, No. 2013DFA32150;中国博士后科学基金资助项目, No. 2013M531395;江苏省博士后基金资助项目, No. 苏人社发(2012)468号.
作者贡献分布: 此课题由邰伯军与姚敏共同设计; 实验与数据整理由姚敏、蔚丹丹及王理完成; 样本收集及统计学处理由钱琦、时杨、蔚丹丹及陆少林完成; 论文写作由姚敏与姚登福共同完成.
通讯作者: 姚敏, 副教授, 226001, 江苏省南通市启秀路19号, 南通大学医学院免疫学教研室. yaodf@ahnmc.com
电话: 0513-85052297
收稿日期: 2014-02-24
修回日期: 2014-04-13
接受日期: 2014-04-17
在线出版日期: 2014-06-08
Abstract

目的: 观察以短发夹RNA(short hairpin RNA, shRNA)下调磷脂酰肌醇蛋白多糖-3(glypican-3, GPC-3)基因转录, 对抑制肝癌MHCC-97H细胞侵袭和血管新生的作用与机制.

方法: 将对GPC-3特异性shRNA转染肝癌MHCC-97H细胞, 以荧光定量PCR和Western blot分析GPC-3 mRNA及蛋白表达; 以5-ethynyl-2'-deoxyuridine(EdU)和Transwell法等评估细胞增殖、迁移和侵袭能力.

结果: shRNA1转染MHCC-97H细胞, GPC-3在mRNA水平下降75.6%(t = 15.473, P<0.001), 蛋白表达同步下调; 干预GPC-3基因转录, 可抑制肝癌细胞增殖, 细胞迁移与侵袭能力减低, 与抗癌药物具协同作用; Wnt/β-catenin中β-catenin表达下调67.7%; Hedgehogs通路中脑胶质瘤相关癌基因1(glioma-associated oncogene 1, Gli1)表达上调53.3%; shRNA1转染72 h细胞血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)表达下调54.2%(t = 46.746, P<0.001).

结论: shRNA下调GPC-3转录, 经Wnt/β-catenin和Hh信号通路抑制癌细胞迁移、侵袭和血管新生, 为肝癌基因治疗潜在的分子靶目标.

Keywords: 肝细胞性癌; 磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3; shRNA; 血管新生

核心提示: 以特异性短发夹RNA(short hairpin RNA, shRNA)沉默磷脂酰肌醇蛋白多糖-3(glypican-3, GPC-3)基因转录, 分析Wnt/β-catenin通路β-catenin和Hedgehogs通路中脑胶质瘤相关癌基因1(glioma-associated oncogene 1, Gli1)表达的作用, 干预GPC-3转录抑制肝癌细胞侵袭和血管新生.