研究快报
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世界华人消化杂志. 2014-05-18; 22(14): 1992-1997
Published online 2014-05-18. doi: 10.11569/wcjd.v22.i14.1992
LNAzyme设计及其体外特异性抑制丙型肝炎病毒C基因的表达
邓益斌, 农乐根, 梁祚仁, 张梁, 覃羽华, 何平
邓益斌, 农乐根, 梁祚仁, 张梁, 何平, 覃羽化, 右江民族医学院附属医院医学检验中心 广西壮族自治区百色市533000
邓益斌, 副教授, 医学博士, 主要从事基因诊断与治疗的研究.
基金项目: 广西自然科学基金资助项目, No. 2011GXNSFA018285.
作者贡献分布: 该研究实验及锁核酸核酶分子设计由邓益斌完成; 研究经费来源于邓益斌主持的广西自然科学基金项目; 细胞培养及锁核酸核酶转染由张梁完成; 病毒核酸检测由梁祚仁完成; 病毒荧光素酶基因表达检测由覃羽华完成; 锁核酸核酶细胞毒性检测由何平完成; 数据分析及论文撰写由邓益斌完成; 农乐根提出修改意见.
通讯作者: 邓益斌, 副教授, 医学博士, 533000, 广西壮族自治区百色市右江区中山二路18号, 右江民族医学院附属医院医学检验中心. enbin0776@sina.com
电话: 0776-2852592
收稿日期: 2014-02-22
修回日期: 2014-03-20
接受日期: 2014-04-04
在线出版日期: 2014-05-18
Abstract

目的: 探讨针对丙型肝炎病毒(hepatitis C virus, HCV)C基因的锁核酸核酶对病毒RNA复制与表达的特异性抑制作用.

方法: 设计合成能切割HCV C基因位点的DNAzyme、硫代DNAzyme和LNAzyme. 实验设对照组和实验组. 对照组包括空白对照组、脂质体对照组和脂质体-无关LNAzyme对照组. 实验组包括脂质体-DNAzyme、脂质体-硫代DNAzyme组和脂质体-LNAzyme组. 以阳离子脂质体介导转染HepG2.9706细胞. 采用荧光定量PCR和化学发光技术分别监测24、48、96 h细胞培养上清液中HCV RNA含量及荧光素酶基因表达; 四甲基偶氮唑蓝(MTT)法监测细胞代谢.

结果: 加入药物后, 脱氧核酶、硫代脱氧核酶及锁核酸核酶组对HCV RNA复制和荧光素酶基因表达的抑制作用均较对照组强(P<0.01), 其中, 锁核酸核酶的抑制作用均较脱氧核酶及硫代脱氧核酶明显(P<0.05), 平均抑制率分别达47.55%和52.44%, 且随用药时间延长, 抑制率呈增高趋势, 96 h后, HCV RNA复制和荧光蛋白表达的下降率均较用药前明显(P<0.01), 其中, 锁核酸核酶的抑制作用均较脱氧核酶及硫代脱氧核酶明显(P<0.05), 平均下降率分别达79.40%和80.05%. 而LNAzyme对细胞活性基本无影响.

结论: LNAzyme能特异性抑制HCV C基因的复制与表达, 且优于硫代修饰的DNAzyme.

Keywords: 丙型肝炎; 丙型肝炎病毒; 锁核酸核酶; 非编码区; 基因表达

核心提示: 针对丙型肝炎病毒(hepatitis C virus, HCV)C基因位点的锁核酸核酶, 体外能特异性抑制病毒基因调控, 为抗HCV基因治疗提供理论和实验依据, 有望成为RNA病毒基因治疗的新型反义核酸药物.