Published online 2014-04-28. doi: 10.11569/wcjd.v22.i12.1669
修回日期: 2014-03-15
接受日期: 2014-03-19
在线出版日期: 2014-04-28
目的: 观察高尔基体磷蛋白3(Golgi phospho-protein 3, GOLPH3)基因过表达后胃癌细胞增殖的情况.
方法: 构建GOLPH3基因过表达重组慢病毒颗粒pGC-FU-GOLPH3-EGFP, 用慢病毒法感染胃癌细胞株SGC-7901, 利用荧光显微镜(Axiovert200)观察感染后细胞内EGFP表达的情况, 利用流式细胞技术检测慢病毒的感染效率, 采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time polymerase chain reaction)和蛋白质印迹(Western blot)技术分别在基因水平和蛋白水平检测GOLPH3在SGC-7901-GOLPH3组(感染pGC-FU-GOLPH3-EGFP质粒的SGC-7901)、SGC-7901-empty-vector组(感染pGC-FU-EGFP质粒的SGC-7901)和SGC-7901-blank组(未感染慢病毒的SGC-7901)的表达水平; 以四唑蓝比色法(MTT)检测GOLPH3基因过表达后胃癌细胞增殖的情况; Westernblot技术检测胃癌细胞SGC-7901稳转细胞株中哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin, mTOR)和磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)的表达水平.
结果: 建立了慢病毒感染率接近100%的胃癌细胞株SGC-7901, 在体外能够长期稳定表达绿色荧光蛋白; SGC-7901-GOLPH3组GOLPH3 mRNA和蛋白表达水平明显高于SGC-7901-empty-vector组和SGC-7901-blank组(均P<0.05); MTT法结果显示胃癌细胞GOLPH3基因过表达后, 增殖能力明显增强, 与SGC-7901-empty-vector组和SGC-7901-blank组相比差别有统计学意义(均P<0.05); SGC-7901-GOLPH3组、SGC-7901-empty-vector组和SGC-7901-blank组中mTOR总蛋白的表达无明显变化, 而SGC-7901-GOLPH3组p-mTOR蛋白表达量较SGC-7901-empty-vector组和SGC-7901-blank组明显升高, 与两对照组相比, 上调GOLPH3能明显促进SGC-7901-GOLPH3组p-mTOR蛋白的表达(均P<0.05).
结论: GOLPH3基因可能是通过上调mTOR信号通路中mTOR蛋白磷酸化水平来促进胃癌细胞增殖.
核心提示: 本研究通过胃癌细胞株SGC-7901体外研究, 表明高尔基体磷蛋白3(Golgi phospho-protein 3)基因可能是通过上调哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin, mTOR)信号通路中mTOR蛋白磷酸化水平来促进胃癌细胞生长增殖.