研究快报
Copyright ©The Author(s) 2013. Published by Baishideng Publishing Group Inc. All rights reserved.
世界华人消化杂志. 2013-02-28; 21(6): 521-526
Published online 2013-02-28. doi: 10.11569/wcjd.v21.i6.521
TNFα通过TNFR1/PKCα和TNFR2信号通路诱导人肾小球系膜细胞IP3R1的表达
王育蓉, 章欢, 孙辉, 李翠红, 刘沛
王育蓉, 章欢, 孙辉, 李翠红, 江西省南昌大学附属医院九江市第一人民医院消化科 江西省九江市 332000
刘沛, 中国医科大学附属一院肝病中心 辽宁省沈阳市 110001
王育蓉, 副主任医师, 主要从事肝脏疾病临床与实验方面的研究.
基金项目: 江西省卫生厅科研基金资助项目, No. 20123192.
作者贡献分布: 本课题由王育蓉、孙辉及刘沛合作设计; 整个实验及操作由王育蓉、章欢及李翠红完成; 数据整理由章欢与李翠红完成; 论文撰写由王育蓉完成.
通讯作者: 王育蓉, 副主任医师, 332000, 江西省九江市塔岭南路48号, 江西省南昌大学附属医院九江市第一人民医院消化科. hldwyr2010@163.com
电话: 0792-8508798
收稿日期: 2012-10-17
修回日期: 2013-11-21
接受日期: 2013-02-20
在线出版日期: 2013-02-28
Abstract

目的: 探讨肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor α, TNFα)对人肾小球系膜细胞(human mesangial cells, HMCs)IP3R1蛋白和mRNA表达的影响及PKC和肿瘤坏死因子受体(tumor necrosis factor receptor, TNFR)在此信号通路中的作用, 以期为肝肾综合征(hepatorenal syndrome, HRS)肾小球滤过率下降的发生机制和防治思路提供理论依据.

方法: 用实时定量PCR和免疫印记法检测IP3R1 mRNA和蛋白表达的情况, 并分别用PMA耗竭内源性蛋白激酶C(endogenous protein kinase C, PKC), PKCα特异性抑制剂Safingol和PKCδ特异性抑制剂Rottlerin及HA-DN-PKCα质粒转染干预上述诱导实验. 同时, 用免疫印记法检测TNFα对PKCα和p-PKCα的表达的影响. 此外, 免疫印记法检测TNFR对PKCα的活化及IP3R1蛋白表达的影响.

结果: TNFα作用HMCs后, IP3R1蛋白和mRNA表达均明显增加. PMA、PKCα抑制剂Safingol, HA-DN-PKCα质粒转染均能明显阻断TNFα诱导的IP3R1蛋白的上调, 而PKCδ抑制剂Rottlerin无明显阻断作用. TNFα刺激HMCs, 各不同时间组总PKCα蛋白表达无明显差异, 而TNFα刺激8 h p-PKCα蛋白表达明显增加. TNFR1抗体+TNFα组和TNFR2抗体+TNFα组, IP3R1蛋白表达均有明显的不同程度的下降. TNFR1抗体+TNFα组p-PKCα蛋白表达明显下降, 而TNFR2抗体+TNFα组, p-PKCα蛋白表达无明显变化.

结论: TNFα能上调HMCs中IP3R1蛋白及IP3R1 mRNA的表达. 活化的PKCα可能在TNFα上调IP3R1的表达中起重要作用. TNFα可能通过TNFR1/PKCα途径及TNFR2途径上调IP3R1的表达.

Keywords: 肝肾综合征; 肿瘤坏死因子α; Ⅰ型1,4,5-三磷酸肌醇受体; 蛋白激酶C α; 肿瘤坏死因子受体