基础研究
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世界华人消化杂志. 2013-02-08; 21(4): 307-312
Published online 2013-02-08. doi: 10.11569/wcjd.v21.i4.307
大鼠枯否细胞的分离、鉴定以及LPS刺激诱导TNF-α的表达
叶长根, 梁冬雨, 赵亮, 于芳苹, 孙水林, 张吉翔, 刘亮明
叶长根, 梁冬雨, 赵亮, 于芳苹, 刘亮明, 上海交通大学附属第一人民医院松江分院 上海市 201600
叶长根, 孙水林, 张吉翔, 南昌大学第二附属医院 江西省南昌市 330000
叶长根, 硕士, 主要从事肝衰竭和肝损伤方面的研究.
基金项目: 国家自然科学基金资助项目, Nos. 81070357, 30660066.
作者贡献分布: 研究经费、实验设计与论文修改由刘亮明负责; 叶长根负责实验研究与论文撰写; 梁冬雨、赵亮、于芳苹及孙水林参与实验研究; 张吉翔负责实验质量控制.
通讯作者: 刘亮明, 副教授, 201600, 上海市松江区中山中路746号, 上海交通大学附属第一人民医院松江分院肝病科. liuliangming@hotmail.com
电话: 021-67720053
收稿日期: 2012-10-29
修回日期: 2013-01-10
接受日期: 2013-01-18
在线出版日期: 2013-02-08
Abstract

目的: 分离、培养和鉴定枯否细胞, 并探讨LPS刺激对细胞肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-α, TNF-α)表达和分泌的影响.

方法: 采用在体原位灌注、密度梯度离心和早期细胞换液等方法分离纯化大鼠肝枯否细胞(kupffer cell, KC), 并采用墨汁吞噬和ED2染色试验对分离培养的细胞进行鉴定. TNF-α表达和分泌采用RT-PCR和酶联免疫技术(enzyme-linked immunosorbent, ELISA)检测.

结果: 成功分离和纯化大鼠肝KC, 并经墨汁吞噬和ED2染色试验鉴定证实; LPS刺激KC细胞内TNF-α mRNA的表达较非刺激细胞(PBS处理细胞)显著升高(1.10±0.02 vs 0.09±0.01, P<0.001). 另外, LPS刺激较非刺激KC培养上清液TNF-α蛋白的水平也显著升高(487.10 pg/mL±5.56 pg/mL vs 39.41 pg/mL±15.30 pg/mL, P<0.001).

结论: 原位灌注和密度梯度离心法能有效分离纯化大鼠KC, LPS刺激可诱导其表达和分泌大量TNF-α.

Keywords: 枯否细胞; 培养; 脂多糖; 肿瘤坏死因子-α